EBP-1自身反应性T淋巴细胞与慢性HBV感染肝损伤的相关性研究

慢性HBV感染的肝损伤与包括"bystander"T细胞在内的非特异性炎细胞浸润密切相关。由于慢性乙型肝炎（CHB）患者存在自身免疫现象，我们推测肝脏炎症部位的bystander T细胞可能具有自身反应性。我们首次发现CHB患者血清中特异性存在抗EBP-1抗体。鉴于EBP-1是一种在肝组织高表达的胞内蛋白，推测其可能作为自身抗原主要通过诱发自身反应性T细胞参与肝损伤。我们拟从免疫识别研究入手，分析CHB患者中是否存在特异性识别EBP-1的CD4+及CD8+T细胞，并通过免疫信息学技术及细胞功能实验鉴定EBP-1中优势性CD4+、CD8+T细胞表位，然后应用Pentamer、多色流式技术以及功能性实验分析CHB中EBP-1表位特异性CD4+及CD8+T细胞的频率、表型及功能，初步探讨EBP-1自身反应性T细胞与慢性HBV感染肝损伤的相关性，从全新角度对慢性HBV感染肝损伤机制作出重要补充。

本课题通过血清学蛋白质组学技术，找到了能与CHB病人血清自身抗体发生结合反应HepG-2 细胞系来源的蛋白质EBP-1。进一步利用重组蛋白和特异性抗体验证后，证实了CHB患者血清中的确存在针对EBP-1的自身抗体。通过CHB患者肝穿组织免疫组织化学染色，明确EBP-1的表达情况，并发现EBP-1的染色强度随着肝组织炎症损伤严重程度的增加。提示：EBP-1的表达与肝组织病理炎症程度密切相关。CHB患者血清中抗EBP-1自身抗体IgG水平显著高于健康对照，而且与血清转氨酶、总胆红素以及凝血酶原时间均有正相关。我们观察到血清anti-EBP-1 IgG水平和阳性率在慢性活动性肝炎患者以及重型肝炎患者中显著升高，尤其是重型患者血清中具有最高的阳性率和抗体水平。提示：anti-EBP-1 IgG水平与CHB肝损伤有密切关系；另外，我们还检测到部分慢性丙肝、自身免疫性肝炎患者以及系统性红斑狼疮患者血清中抗EBP-1自身抗体IgG水平升高。提示：EBP-1并非CHB特有的自身抗原，而与多种慢性炎症性疾病有关，可能为一种普遍的自身抗原。我们进一步用IFN-γELISPOT检测证实部分CHB病人外周血淋巴细胞具有重组EBP-1蛋白或肽池的特异性反应性。且具有肝损伤程度较重(TBIL >5×N, PTA < 60%)的患者中有46.43% (13 of 28)的对于EBP-1具有反应性。但是在肝损伤程度较轻或中度的患者中只有8.82% (3 of 34) 对于EBP-1有反应。而且两组间对于EBP-1的反应程度也有显著差异。重度组的阳性反应个体对于EBP-1的反应强度（表示为刺激指数）显著高于轻度和中度组 (p <0.01)。结合部分CHB患者肝组织活检病理学评分结果，HAI分值高的患者相应地EBP-1刺激的IFN-γ分泌强度更高，而HAI分值低的患者相应地对于EBP-1的反应性就比较弱 (P<0.05)。综上：本研究首次证实CHB患者体内存在抗EBP-1的自身免疫反应，可能参与肝损伤。