SDCBP(syntenin/MDA-9)诱导乳腺癌他莫昔芬治疗耐药和促进雌激素受体阴性乳腺癌进展的机制研究

It is inevitable question to answer in endocrine therapy of breast cancer (BCa) that how to deal with primary and secondary drug tolerance. The estrogen receptor (ER) negative BCa, particular the triple negative breast cancer (TNBC), has more aggressive clinical course and less effective treatments due to lack of specific targets. Our preliminary work showed that SDCBP(Syndecan Binding Protein, syntenin/MDA-9) was over-expressed in ER negative breast cancer and the expression level was negatively related with ER; SDCBP expression was inhibited by estrogen and induced by tamoxifen in ER positive BCa cell line MCF-7; SDCBP silencing can restrain TNBC cell proliferation and enhance the inhibition effect of tamoxifen on MCF-7 proliferation; and Dasatinib can prohibit c-Src phosphorylation and effect as mentioned above for SDCBP silencing. In this study，we plan to identity the interaction mechanism of SDCBP with c-Src in breast cancer cell and explore its effect on biological behaviors of tumor cells; examine the molecular mechanism of ER signalling and Tamoxifen on SDCBP expression; and use collagen gel droplet embedded culture drug sensitivity test （CD-DST） to analyse the relationship between SDCBP expression and Dasatinib sensitivity in tumor cells. My work will provide theoretical basis on developing new strategy to overcome endocrine-therapy drug tolerance in BCas and to treat TNBCs individually.

原发性和继发性耐药是乳腺癌内分泌治疗不可回避的问题。而雌激素受体（ER）阴性，特别是三阴性乳腺癌恶性进展更为迅速并且缺乏特异性的治疗靶标。我们的前期工作表明，SDCBP(syntenin/MDA-9)在ER阴性的乳腺癌中过表达并且与其表达水平呈负相关；SDCBP的表达受雌激素抑制并且在他莫昔芬(TAM)的作用下过表达；SDCBP沉默可以抑制三阴性乳腺癌细胞增殖并加强TAM抑制MCF-7细胞增殖的作用；达沙替尼可以通过抑制c-Src的磷酸化，发挥相同的细胞增殖抑制效应。我们拟深入研究在乳腺癌细胞中SDCBP与c-Src相互作用机制并探索该相互作用对肿瘤生物学行为的影响；探索ER信号通路和TAM影响SDCBP表达的分子机制；应用胶滴肿瘤药敏检测技术（CD-DST）研究患者肿瘤组织细胞中SDCBP表达水平与达沙替尼敏感性之间的关系；为开发内分泌治疗耐药及三阴性乳腺癌的治疗新策略奠定基础。

近几年来，尽管已经开发了一些针对三阴性乳腺癌（TNBC）的靶向治疗药物，但均未取得预期的疗效。激素受体阳性乳腺癌患者内分泌治疗耐药也是一个亟待解决的问题。在前期研究中我们发现在乳腺癌组织中多配体聚糖结合蛋白 (SDCBP)过表达；SDCBP的表达受雌激素的抑制；在TNBC细胞系中，SDCBP沉默可以通过促进p27而抑制cyclin E的表达，抑制细胞增殖；在ER阳性乳腺癌细胞系MCF-7中，SDCBP沉默可以明显增强TAM抑制细胞增殖的效应。我们同时发现，在TNBC中应用达沙替尼（Dasatinib）抑制c-src的活化，可以完全阻断SDCBP过表达的促进细胞增殖的作用。. 本课题的研究中，我们发现在TNBC细胞中，SDCBP可以与c-src相互作用并促进c-src磷酸化，而这种促进效应可以被Dasatinib所完全阻断。在TNBC组织中，SDCBP与c-src的表达具有高度的一致性。体外细胞学实验和裸鼠成瘤动物实验的结果均显示，野生型SDCBP过表达明显加速了TNBC细胞的增殖，存活和细胞周期进程；在Dasatinib处理的条件下，SDCBP的这种促进作用消失。在雌孕激素受体阳性的乳腺癌细胞中，在他莫昔芬（TAM）存在的情况下，SDCBP沉默促进P21的表达和抑制Rb的磷酸化水平，加强TAM的效应；同时SDCBP沉默又有独特的效应，如促进P27和抑制cyclin E的表达，而这些过程也很可能和SDCBP与c-src的相互作用有关。MCF-7细胞中，SDCBP沉默可以加强雌激素靶基因对雌激素的应答效应。在雌激素受体阳性的乳腺癌组织中，SDCBP的表达与PR及PR/ER比值呈负相关。MCF-7细胞中应用双荧光素酶报告基因分析雌激素处理影响SDCBP基因转录活性的关键区域，我们发现SDCBP在转录水平受雌激素负调控的区域可能在SDCBP转录起始点上游1500-3000bp之间。应用免疫共沉淀的方法，找到了3个在与c-src结合并可能参与SDCBP与c-src相互作用的分子。. SDCBP有可能作为TNBC适用Dasatinib治疗的一个重要标记物。特异性的SDCBP沉默或抑制其下游的信号通路，将为提高内分泌治疗的疗效，特别是针对内分泌治疗原发耐药和已经发生继发性耐药的乳腺癌的治疗提供新的思路。