Nephrin在内皮祖细胞向足细胞样细胞分化中的作用及分子机制研究

Podocyte injury is the main pathological change and important reason in the process of glomerular proteinuria. Our previous research showed that the transplantation of endothelial progenitor cells (EPC) improved the level of FSGS model's proteinuria. We also found that EPC could be induced to differentiation when co-cultured with podocyte, and transfected nephrin (NPHS1) of signal transduction function, which have enhanced the expression of the podocyte phenotype molecules. We presume that NPHS1 played an important regulatory role in the EPC differentiation to podocyte-like cell , the mechanism of which may be activated by the signal transduction induced by NPHS1. In this study, function and mechanism of NPHS1 in differentiation would be explored through real-time quantitative PCR and western blot technology, and then characteristic of EPC transplantation to glomerular raising and effect to the level of proteinuria could be observed by double immunofluorescent labeling on FSGS mice model, wich further elucidate the therapeutic effect of EPC transplantation and its possible mechanism. The result is expected to clarify the mechanism of differentiation of EPC to podocyte-like cell, and to provide experimental basis for the EPC treatment of glomerulopathy disease.

足细胞损伤是蛋白尿性肾小球疾病的主要病理改变，也是蛋白尿形成的重要原因。我们前期研究显示内皮祖细胞（EPC）移植可改善FSGS模型蛋白尿水平，近期研究发现，与足细胞共培养后，EPC可被诱导分化而表达足细胞特征性分子，转染具有信号转导功能的Nephrin (NPHS1)分子，可增强EPC上足细胞表型分子的表达。我们认为，EPC可以向足细胞样细胞分化，NPHS1在EPC分化过程中发挥了重要调控作用，其机制可能与NPHS1活化的信号通路启动分化事件有关。本研究首先在细胞水平通过定量PCR、WB等技术，探讨NPHS1在EPC向足细胞样细胞分化中的作用及其分子机制，继而利用小鼠FSGS模型通过免疫荧光双标等方法观察移植EPC向肾小球募集的时空特点及对蛋白尿水平等的影响，观察EPC移植的治疗效果及可能机制。研究结果有望阐明EPC向足细胞样细胞分化的分子机制，为EPC移植治疗肾小球性疾病提供实验依据。

足细胞损伤是蛋白尿性肾小球疾病的主要病理改变，也是蛋白尿形成的重要原因。我们前期研究显示内皮祖细胞（EPC）移植可改善大鼠FSGS 模型蛋白尿水平。因此我们认为，EPC 可以向足细胞样细胞分化，NPHS1 在EPC 分化过程中发挥了重要调控作用，其机制可能与NPHS1 活化的信号通路启动分化事件有关。本研究在细胞水平探讨NPHS1在EPC 向足细胞样细胞分化中的作用及其分子机制，为进一步研究EPC 移植治疗蛋白尿性肾小球性疾病提供依据。在本实验中，按计划完成了骨髓源性EPC的培养与鉴定，由于MSC与EPC培养体系非常相近，以及近年MSC对肾损伤的保护作用的研究基础，在培养EPC的同时我们还进行了MSC的培养和鉴定，足细胞的原代培养，NPHS1腺病毒的构建并转染EPC，足细胞和EPC以及足细胞和MSC共培养，目前的初步结果显示EPC和足细胞共培养时细胞生长情况欠佳（在此部分将在后续的研究中继续进行），意外的结果是足细胞和MSC共培养后，MSC有足细胞特征性标志物的的表达，初步证实 MSC在物理特性即结构上具有向足细胞分化的可能，进一步研究将深入到其功能测定，希望达到MSC向足细胞分化，完成损伤足细胞的结构修复和功能修复的作用，并继而在动物模型上验证其促进蛋白尿下降、改善肾功能的作用。