二陈汤通过JNK信号转导通路干预转移性非小细胞肺癌多药耐药及肿瘤血管生成的实验研究

Er-chen Decoction is a classic phlegm prescription. Phlegm syndrome and blood stasis syndrome is the most common syndrome in advanced non-small cell lung cancer (NSCLC). According to the principles of diagnosis and treatment, Er-chen Decoction should be a basis prescription for advanced NSCLC. Our previous studies showed that Er-chen Decoction could improve immune function and quality of life, reduce tumor marker levels in patients with advanced NSCLC. It could also inhibit proliferation of highly metastatic human lung cancer cells (PG-BE1) and A549 lung cancer cells through intervene JNK and p38 signal transduction pathway. From above, we could see that Er-chen Decoction could inhibit NSCLC through intervene MAPK pathway, so as to inhibit lung cancer Intercellular adhesion molecule-1（ICAM-1）. JNK pathway is closely related to multidrug resistance (MDR) and angiogenesis. Preliminary experiments showed that Er-chen Decoction had reversal effect on cisplatin resistance. Therefore, we intend to use Er-chen Decoction to intervene MDR cells line A549/DDP, PG-BE1 lung cancer cells line and the tumor-bearing nude mice. We hope to observe the effect of Er-chen Decoction on MDR and angiogenesis, so as to further explore the mechanism of Er-chen Decoction on NSCLC and the relationship with JNK pathway. Then the microscopic effect might be clarified that how reducing phlegm works in treating Phlegm and blood stasis syndrome of advanced NSCLC.

二陈汤是经典的化痰方剂，痰证、瘀证是晚期非小细胞肺癌（NSCLC）最常见的实证，根据辨证论治原则，二陈汤可作为晚期NSCLC治疗的基础方。前期研究发现，二陈汤可提高晚期NSCLC患者免疫功能、生活质量及降低肿瘤标记物水平；可抑制高转移性人肺癌细胞（PG-BE1）增殖，可通过干预MAPK通路的JNK及p38通路，干预PG-BE1及肺癌A549细胞的内皮细胞粘附分子-1表达而抑制肿瘤。JNK通路与肿瘤多药耐药（MDR）及血管生成密切相关。前期实验显示，二陈汤有逆转顺铂(DDP)耐药的作用趋势，因此，我们拟以二陈汤干预A549/DDP多药耐药细胞、PG-BE1细胞及相应荷瘤裸鼠，观察其对MDR、肿瘤血管生成的作用及与JNK通路的关系，探讨二陈汤抑制JNK通路对NSCLC的MDR及肿瘤血管生成的影响，进一步明确二陈汤干预NSCLC的机制，明确化痰法在晚期NSCLC痰瘀互结证治疗中的微观作用。

非小细胞肺癌（NSCLC）为目前人类因癌症死亡的主要原因之一。课题组前期研究显示，痰瘀互结，气阴两虚是晚期NSCLC最常见的中医证候，健脾化痰的经典方剂二陈汤可作为晚期 NSCLC 治疗的基础方，前期临床研究提示，其可提高晚期 NSCLC 患者免疫功能、生活质量及降低肿瘤标记物水平；前期实验研究提示其可通过干预 JNK/p38MAPK通路，抑制ICAM-1表达而抑制肺癌PG-BE1、A549细胞株增殖。本次研究，课题组针对晚期NSCLC最常见的中医证候，形成了以健脾化痰，益气养阴、祛痰逐瘀，益气养阴祛痰散结等不同治则指导下，以二陈汤为基础的不同复方，对NSCLC细胞株A549及A549/DDP及荷瘤裸鼠、小鼠的肿瘤控制进行观察，使用细胞实验、裸鼠/小鼠的动物实验，通过MTT法、免疫荧光、免疫组化、流式细胞检测技术、western blot等实验技术，对中药干预下的肿瘤细胞/组织的JNK、p38MAPK 通路与肿瘤多药耐药（MDR）及血管生成的关系进行检测分析。结果发现，二陈汤及二陈汤复方对A549及A549/DDP细胞株均有一定的抑制作用，而以益气养阴、祛痰逐瘀的二陈汤加益气养阴逐瘀方疗效最显著，二陈汤及其复方对JNK、p38MAPK通路均有不同程度的抑制作用，对VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2有不同程度的抑制作用，其对肿瘤血管生成的抑制作用与其抑制JNK/p38 MAPK 通路密切相关。二陈汤及其复方对小鼠的免疫功能有不同程度的提升作用，表现在可提升小鼠的脾指数，促进CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞增多，并对Th17、VEGFR-2、JNK/p38 MAPK有显著抑制作用；二陈汤及其复方对A549/DDP细胞株有一定程度的抑制作用，对细胞株的多药耐药指标P-gP、MRP、BCL-2、GSTP1、MVP-LRP有不同程度的抑制作用。以上结果提示：二陈汤及其复方，可通过JNK/p38 MAPK 通路抑制NSCLC 的MDR 及肿瘤血管生成，提高机体的免疫功能，具有进一步开发研究的意义。