尿调蛋白在肾小管间质纤维化中补体活化的作用及机制研究

Tubulointerstitial fibrosis is an important factor in the occurrence and progression of chronic kidney disease. Uromodulin, also known as Tamm-Horsfall protein, is exclusively expressed in renal tubular epithelial cells. Studies have shown that uromodulin plays an important role in the initiation and progression of tubulointerstitial fibrosis, but the specific mechanism remains unclear. The abnormal activation of the complement system is an important pathogenesis of renal injury in tubulointerstitial fibrosis. Recent evidences and our previous study results found that uromodulin and complement could interact with each other. Therefore, we speculate that uromodulin may influence the complement activation in renal tubular epithelial cells and participate in the process of tubulointerstitial fibrosis. In this study, we will investigate the influence and possible mechanisms of uromodulin on the activation of complement system in renal tubular epithelial cells through experiments in vitro and in vivo. This study could provide us a potential target for prevention of chronic kidney disease.

肾小管间质纤维化是影响慢性肾脏病发生和进展的重要因素。尿调蛋白特异表达于肾小管上皮细胞，研究证实，尿调蛋白在肾小管间质纤维化的启动和进展中起重要作用，但具体作用机制研究甚少。补体系统的异常活化是肾小管间质纤维化的重要机制。既往研究及我们的前期研究发现尿调蛋白与补体之间存在相互作用。因此，我们推测尿调蛋白可能影响肾小管上皮细胞局部补体活化，从而参与肾小管间质纤维化过程。本研究拟通过细胞及动物实验，利用基因沉默、基因敲除等方法，探讨尿调蛋白对肾小管上皮细胞补体活化情况的影响及其机制，阐明尿调蛋白与补体系统之间的联系，并为临床预防和延缓慢性肾脏病的进展提供干预的靶点。

背景：尿调蛋白特异表达于肾小管上皮细胞，研究证实，尿调蛋白在肾小管间质纤维化的启动和进展中起重要作用，但具体作用机制研究甚少。补体系统的异常活化是肾小管间质纤维化的重要机制。既往研究及我们的前期研究发现尿调蛋白与补体之间存在相互作用。因此，我们推测尿调蛋白可能影响肾小管上皮细胞局部补体活化，从而参与肾小管间质纤维化过程。.内容：.1.收集了在我院确诊的94例慢性肾脏病患者（IgA 肾病患者58例、狼疮性肾炎患者36例）的血标本及临床资料，应用ELISA方法进行了尿调蛋白及相关补体的检测。.2.Western-blot法检测肾小管上皮细胞尿调蛋白表达，采用ELISA方法和免疫荧光法检测补体激活产物Ba、C3a、C5a、Bb、MAC、C3d、C4d，补体C1q，C2，C4，B因子，C3，C5，H因子、CD46、CD55、C3aR和C5aR的测定采用和Western-blot方法；建立大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型，肾小管间质损伤的评估应用大鼠苏木精-伊红染色和Masson染色，UUO大鼠和正常大鼠注射si-NC或si-Umod和补体抑制剂。.结果：.1. 94例慢性肾脏病患者（IgA 肾病患者58例、狼疮性肾炎患者36例）血浆尿调蛋白水平显著低于正常对照;血浆C3a 、mac水平均显著高于正常对照。血浆尿调蛋白水平与血浆C3a水平（r =-0.41，P<0.001）, 与血浆mac水平（r =-0.301，P=0.003）均呈负相关，与C1q水平（r =0.283，P =0.006）呈正相关。.2. Umod基因沉默促进肾小管上皮细胞补体系统的激活。UUO大鼠模型观察到尿调蛋白下调及补体激活，并有严重的肾小管损伤、肾小管扩张和上皮萎缩； UMOD基因沉默导致补体系统的激活，同时促进肾小管间质纤维化。此外，补体抑制剂的加入明显减轻肾小管损伤和纤维化。.科学意义：我们的研究提示UMOD基因沉默介导的补体途径，加重大鼠肾小管间质损伤的研究，为肾小管间质损伤的发生发展和治疗肾小管间质损伤的新型药物提供了新的线索。