MTDH在舌癌中的表达及其促血管生成的分子机制研究

舌癌发生、发展中血管生成的作用及其分子机制是研究的热点。MTDH介导肿瘤血管生成的作用日益引起重视。我们前期研究发现MTDH与舌癌血管生成密切相关，且介导VEGF表达。本课题拟利用具有从正常舌粘膜、不典型增生、原位癌到浸润癌的小鼠舌癌模型对MTDH进行动态研究，探讨MTDH与舌癌发生、发展和血管生成的关系。采用RNA干扰技术分别上调和下调舌癌细胞MTDH表达，检测P13K/Akt/mTOR和RAS-Raf-MEK-ERK通路活性及对VEGF表达的影响；用CHIP技术探索MTDH与靶基因作用模式；通过血管生成三维模型观测MTDH对血管内皮细胞的作用，探明其促进舌癌血管生成的分子机制；并结合临床标本分析人舌癌组织中MTDH表达与病理参数的关系，为舌癌靶向治疗和MTDH作为舌癌预后判断指标提供理论依据。

一.背景：舌癌发生、发展中血管生成的作用及其分子机制是该领域的研究热点。AEG-1介导肿瘤血管生成的作用日益引起重视。我们前期研究也发现AEG-1与舌癌血管生成密切相关,且介导VEGF表达。本课题拟利用具有从粘膜增生、鳞状化生、不典型增生、原位癌、浸润癌到转移癌的小鼠舌癌模型对AEG-1进行动态研究,探讨AEG-1舌癌发生、发展和血管生成的关系。采用慢病毒转染和RNA干扰技术，分别上调和下调舌癌细胞AEG-1表达，检测PI3K/Akt/mTOR和RAS-Raf-MEK-ERK通路活性及对VEGF表达的影响；并用CHIP技术探索AEG-1与靶基因作用模式，通过血管生成三维模型观测AEG-1对血管内皮细胞的作用，探明AEG-1促进舌癌血管生成的分子机制，为舌癌分子靶向治疗提供实验依据。结合临床标本研究，分析人舌癌组织中AEG-1表达与病理参数的关系，为AEG-1作为舌癌早期诊断和预后判断指标奠定基础。.二. 主要研究内容:. 小鼠诱癌过程AEG-1与癌变阶段、血管生成、PI3k/Akt/mTOR 和RAS-Raf-MEK-ERK通路的关系。.检测舌癌发生各阶段AEG-1 mRNA、蛋白的变化，是否存在异常甲基化和基因突变；检测二通路中关键激酶、HIF-1a和VEGF的蛋白及mRNA表达，并用CD34标记血管.2. 体外分析PI3k/Akt/mTOR 和RAS-Raf-MEK-ERK通路在AEG-1调控血管生成中的作用。.检测细胞模型二通路中关键激酶的变化，并用酪氨酸激酶抑制剂处理，通过检测HIF-1a、VEGF的变化及观察血管内皮细胞的形态,探讨以上通路在AEG-1调控血管生成中的作用;CHIP检测AEG-1与PI3k/Akt/mTOR 和RAS-Raf-MEK-ERK通路中关键激酶的相互作用。.3．体内证明AEG-1对舌癌血管生成的调控作用。.通过荷瘤动物模型，体内进一步评价AEG-1对血管生成的调控作用。.4．临床相关研究：.收集人舌癌标本，观察AEG-1与临床病理参数及预后的关系，探讨其对临床病理因素、预后和血管生成的影响。.三. 重要结果:.1. 探明了AEG-1在舌癌发生发展过程中的动态变化及PI3k/Akt/mTOR 和RAS-Raf-MEK-ERK通路在舌癌发生过程中的作用;.2. 分析了AEG-1与舌癌临床各指标的相关性;