Wnt/β-catenin通路基于CBP/p300调控ARDS时Th17细胞分化的机制研究

The effect of treatment ARDS with anti-inflammatory is not satisfied. Immune regulation becomes a new direction of ARDS therapy. Th17 cell mediated immune response has a potential pathogenesis because of the role of recruitment neutrophils and characteristic of inducing both innate and adaptive immune response. The differention of Th17 cells determines by the activity of specific transcription factor RORγt. Recent studies found that nuclear accumulation of β-catenin promoted the expression of RORγt. It was suggested that β-catenin mightbe an important upstream molecular in regulation of RORγt expression. The transcriptional coactivators CBP/p300 as nucleus partners help β-catenin regulate this process. This study proposes to proof the effect of β-catenin on Th17 cell differentiation usingsiRNA, dual luciferase report gene , cre-loxP gene engineering technology, and CHIP-seq to further explore the possible epigenetic mechanism.This is an improvement to our previous studies. It helps to elucidate the precise regulatory mechanisms of Th17 cells and provides theoretical basis for application immune therapy in ARDS.

ARDS抗炎治疗效果并不理想，免疫调控成为研究的新方向。Th17细胞兼具固有免疫应答和适应性免疫应答的特点，且有卓越的募集中性粒细胞的作用，其介导的免疫应答可能是潜在的发病机制。RORγt作为Th17细胞的特异性核转录因子，其转录活性决定了Th17细胞的分化。新近发现β-catenin分子核内积累可以促进RORγt的表达，可能是调控Th17细胞分化的重要上游分子。转录辅因子CBP/p300可作为β-catenin分子的核内伴侣调节这一过程。本课题拟通过siRNA干扰技术、双荧光素酶报告基因和cre-loxp基因工程技术明确β-catenin对Th17细胞分化的影响，并采用染色质免疫共沉淀结合高通量测序技术从表观遗传角度深入探讨可能的机制。这是对我们前期研究的深入和完善，对进一步阐明Th17细胞的精准调控机制有实际意义，为免疫治疗在ARDS中的应用提供理论依据。

急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome, ARDS）是临床常见呼吸危重症，重度ARDS患者病死率高达46.1%。目前对ARDS的临床干预手段侧重于支持治疗，尚未证明药物治疗可显著降低病亡率。故而针对ARDS的临床治 疗策略亟需更多深入研究。炎症反应的爆发和失控是ARDS发生发展的核心环节，中性粒细胞是ARDS炎症反应的主要效应细胞。Th17细胞兼具固有免疫应答和适应性免疫应答的特点，更具有募集中性粒细胞的重要作用，因此TH17介导的炎症免疫机制可能成为ARDS防治的新切入点。RORγt作为Th17细胞的特异性核转录因子，并决定Th17细胞的分化方向。β-catenin分子核内积累可以促进RORγt的表达，可能是调控Th17细胞分化的重要上游分子。转录辅因子CBP/p300可作为β-catenin分子的核内伴侣调节TH17细胞的分化过程。.本课题综合运用多种分子生物学技术探究Th17细胞分化介导的免疫炎症反应在ARDS中扮演的角色及潜在分子调控机制。研究发现，同ARDS患者一样，脂多糖诱导的ARDS小鼠的血清IL-17水平升高，同时小鼠肺组织β-catenin的基因、蛋白表达显著增高。活化的Wnt/β-catenin通路增强TH17介导的免疫炎症反应，加剧 ARDS进展，抑制Wnt/β-catenin通路则可抑制TH17细胞的分化，削弱免疫炎症反应，对ARDS小鼠发挥保护性效应。进一步机制研究发现，ARDS小鼠肺组织CBP、p300、RORγt水平均升高，Wnt/β-catenin通路抑制剂Dkk-1和CBP/p300抑制剂C646可降低ARDS小鼠肺组织中RORγt蛋白表达，减少BALF及肺组织中IL-17含量，降低Th17细胞占CD4+T淋巴细胞比例，减轻ARDS肺组织损伤。以上结果提示Wnt/β-catenin通路可通过转录辅因子CBP/p300调控Th17细胞分化，参与ARDS免疫炎症反应的调控，为ARDS的免疫治疗提供理论依据。