黄芩汤调控NF-κB/Nrf2-ARE通路对溃疡性结肠炎的抗炎/抗氧化应激作用机制研究

Inflammation occupies an important position in the emergence and development of many major diseases. Oxidative stress is an important pathological process of the reaction of the inflammation, and there is closed relationship between anti-inflammatory pharmacology of HUANGQIN TANG and its roles in adjustment of Oxidative stress- antioxidant balance, which is mainly influenced by Nrf2-ARE pathway.The study proposed to begin with whole animal experiments and Cell Cultures In Vitro experiments, establish the inflammatory bowel disease module of mice by using Raw264.7 cell, Caco-2 cell line and Nrf2-/-WT mice respectively. Moreover, the study proposed to investigate the inhibiting effect of HUANGQIN TANG on Nuclear Transcription Factor NF-κB, and the influence on the expression of cell line Nrf2, the transmition of Nrf2 siRNA, the activity and expression of and Nuclear Transcription Factor NF-κB, and Oxidative stress- antioxidant balance by using the Western blot, RT-PCR molecular biology methods. Furthermore, to investigate the change of the above gene, protein expression and biological activity caused by various kinase inhibitors, so as to find the function and mechanism of HUANGQIN TANG on activating Nrf2-ARE pathway, inhibiting Nuclear Transcription Factor NF-κB, and adjusting Oxidative stress- antioxidant balance in the therapeutic procedure of inflammatory bowel disease.

炎症是在许多重大疾病的发生和发展过程中占有十分重要的地位。氧化应激是炎症反应的一个重要病理过程，黄芩汤抗炎药理与其调整氧化应激-抗氧化平衡关系密切，而Nrf2-ARE通路对氧化应激-抗氧化平衡的调控起着关键作用。本研究拟从整体动物实验、体外培养细胞实验等不同层面，分别应用Raw264.7细胞、Caco-2细胞系和Nrf2-/-及野生型小鼠对炎症性肠病模型，以Western blot、RT-PCR等分子生物学方法，观察黄芩汤对核转录因子NF-κB的抑制作用、对Nrf2 正常表达细胞系及转染Nrf2 siRNA 细胞系转录因子Nrf2 活性、表达及氧化应激-抗氧化平衡的影响，以及在各种蛋白激酶抑制剂干预情况下，上述基因、蛋白表达及生物学活性的改变，以期探明黄芩汤激活Nrf2-ARE通路，抑制核转录因子NF-κB，调控氧化应激-抗氧化平衡在炎症性肠病治疗中的作用机制。

炎症是在许多重大疾病的发生和发展过程中占有十分重要的地位。氧化应激是炎症反应的一个重要病理过程，黄芩汤抗炎药理与其调整氧化应激-抗氧化平衡关系密切，而 Nrf2-ARE 通路对氧化应激-抗氧化平衡的调控起着关键作用。本研究拟从整体动物实验、体外培养细胞实验等不同层面，分别应用 Raw264.7 细胞、Caco-2 细胞系，以 Western blot、RT-PCR 等分子生物学方法，观察黄芩汤对核转录因子 NF-κB 的抑制作用、对 Nrf2 正常表达细胞系及转染 Nrf2 siRNA 细胞系转录因子 Nrf2 活性、表达及氧化应激-抗氧化平衡的影响，以及在各种蛋白激酶抑制剂干预情况下，上述基因、蛋白表达及生物学活性的改变，以期探明黄芩汤激活Nrf2-ARE 通路，抑制核转录因子 NF-κB，调控氧化应激-抗氧化平衡在炎症性肠病治疗中的作用机制。 研究结果显示：1、黄芩汤可通过减少NO、IL-6 、TNF-α和PGE2炎症介质的释放来发挥抗炎作用。2、黄芩汤可通过抑制NF-κB的活化来发挥抗炎作用，进而下调炎症介质NO、IL-6 、TNF-α和PGE2的表达。3、黄芩汤可通过抑制MAPK和JAK-STAT信号通路活化来发挥抗炎作用。4、MAPK信号通路中的p38通路对NF-κB通路有较强的调节作用，ERK 、JNK和JAK-STAT通路对NF-κB通路也有调节作用，但是效果没有p38通路明显。5，黄芩汤通过增加SOD、CAT、GSH-px、HO-1和NQO1等II相解毒酶和抗氧化物酶的表达，减少MPO的含量而发挥抗氧化应激作用。6，成功构建了靶向Nrf2的siRNA的Caco-2细胞，并发现黄芩汤可对Nrf2 siRNA的Caco-2细胞有上调Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶的作用。7，Nrf2通路在抗氧化应激过程中起着重要作用，黄芩汤可通过促进Nrf2的活化进而上调Ⅱ相解毒酶和抗氧化物酶的表达而发挥抗氧化应激的作用。