甲基化调控的let-7e靶向作用EZH2在卵巢癌耐药中的作用机制及靶向治疗的研究

microRNA（miRNA）是新发现的一类内源性非编码小RNA，参与细胞活动的多个方面。我们前期基础显示let-7e在卵巢癌化疗耐药组织和细胞中低表达，提高let-7e水平能降低卵巢癌细胞耐药性、抑制卵巢癌耐药相关因子EZH2的表达；更有分析结果提示let-7e低表达可能与DNA甲基化相关。本课题旨在进一步验证let-7e对EZH2的靶向调控，阐明let-7e在卵巢癌耐药机制中的作用，并尝试以miRNA表观遗传调控为切入点进行耐药逆转实验。我们选择性加强／减弱let-7e的表达，观察细胞耐药性以及EZH2表达的改变；荧光素酶报告基因法确定对EZH2的靶向位点；改变基因甲基化状态，考察let-7e表达的表观遗传调控。用药物去甲基化和let-7e模拟物转染进行体外和体内耐药逆转实验，为以miRNA为靶点的临床治疗提供实验基础。

按照研究计划，我们完成了let-7e在卵巢癌产生顺铂耐药性中的作用的相关研究，并在完成计划的基础上增加了动物实验。细胞水平我们发现let-7e表达在对顺铂耐药的人上皮性卵巢癌细胞株A2780/CP中显著降低。用顺铂刺激上皮性卵巢癌细胞株A2780，SKOV3和ES2发现这些细胞中的let-7e水平亦呈顺铂浓度依赖性下降。转染agomir上调let-7e表达后可以增加A2780/CP细胞对顺铂的敏感性，并降低顺铂耐药相关基因EZH2和CCND1的表达。此外，转染let-7e抑制剂后A2780细胞对顺铂的耐药性增强。定量甲基化特异性PCR分析显示耐药细胞中编码let-7e区域临近的CpG岛呈高甲基化状态，用DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR处理细胞或用含有未甲基化let-7eDNA序列的质粒pYr-let-7e-shRNA转染细胞后可恢复let-7e的表达并部分逆转化疗耐药性。在活体水平，let-7e agomirs可逆转顺铂耐药并抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，降低EZH2和CCND1的表达水平。原子吸收分光光度法显示let-7e agomirs辅助顺铂治疗组的肿瘤中的顺铂浓度比单用顺铂组的瘤内顺铂浓度显著增高。综上所述，我们圆满完成了研究项目，我们的结果说明let-7e或许可成为增强上皮性卵巢癌化疗反应性的一个治疗靶点。