淋巴细胞特异性转录因子Spi-B在肺癌免疫逃逸中的功能和机制研究

Immune evasion is considered the hallmark of cancers, and the major bottleneck in the development of therapeutically effective anticancer strategies. We have found that a lymphocyte lineage-restricted transcription factor, Spi-B, is frequently expressed in human lung cancer tissues, disrupting intercellular junctions to enhance metastasis. Further study identified that overexpression of Spi-B significantly increased the percentage of Treg cells in LLC1 subcutaneous tumor and promoted the expression of cytokine and chemokine genes, such as TGFB1, CCL4 and CCL5. These data suggest that Spi-B might have a broad impact on the immune-suppressive tumor microenvironment and promote tumor immune evasion via Treg cells recruitment and expansion. Here, the objective of this project is to focus on the function and regulation of Spi-B in tumor immune evasion using multiple techniques including Trp53F/F Rb1F/F mice, CRISPR/Cas9, 3C, ChIP and immunohistochemistry. Specifically, we will dissect the connection between Spi-B expression level and tumor-infiltrating Treg cells through tissue microarray, and the role of ectopic expression of Spi-B in tumor immune evasion. The results will shed a light in understanding the molecular mechanism of tumor immune evasion and may provide a new target for tumor immunotherapy.

肿瘤免疫逃逸是肿瘤侵袭与转移的原因之一，也是肿瘤免疫治疗的最大障碍。我们的研究已发现淋巴细胞特异性转录因子Spi-B异位表达于肺癌，通过抑制肿瘤细胞本身的紧密连接蛋白，促进了肿瘤转移。进一步研究发现小鼠皮下注射模型中，Spi-B过表达的肿瘤中Treg比例显著增高，并能上调TGFB1、CCL4、CCL5等一系列细胞因子的表达，表明Spi-B在实体肿瘤中的异位表达影响了肿瘤的免疫微环境，提示该蛋白很可能通过Treg细胞来逃逸免疫系统的攻击。本项目将利用Trp53F/F Rb1F/F 转基因小鼠、CRISPR/Cas9、3C、ChIP等技术研究Spi-B是否通过上调TGFB1、CCL4、CCL5来促进Treg浸润以及调控这些基因表达的表观遗传机制，并利用临床肺癌组织芯片研究Spi-B异位表达与Treg浸润的相关性，研究结果将丰富人们对实体肿瘤免疫逃逸机制的理解，为肿瘤免疫治疗提供新的分子靶点。

肿瘤免疫逃逸在恶性肿瘤进展中起关键作用，是抗肿瘤免疫治疗失败的原因之一。Spi-B是淋巴细胞谱系特异性转录因子Ets家族的成员，我们之前的研究发现该蛋白异位表达于人肺癌组织中，主要定位于癌巢中具有间质样特性的浸润能力强的肿瘤细胞。然而，Spi-B对肿瘤免疫微环境的影响仍然不是很清楚。采用小鼠皮下肿瘤模型和人类肺癌临床样本，我们发现Spi-B的异位表达增强了肿瘤相关巨噬细胞的浸润。Microarray的结果表明Spi-B过表达上调了巨噬细胞极化和募集相关的基因，其中包括CCL4。此外，敲低CCL4能够显著抑制Spi-B促进巨噬细胞浸润的能力。这些结果表明，肺癌中Spi-B的异位表达能够通过上调CCL4来促进TAMs的募集，最终导致了肿瘤的进展。. IL-17D是IL-17细胞因子家族的一员，在宿主防御感染和炎症中起着重要作用。然而，IL-17D在肺癌进展中的作用尚不清楚。我们的研究发现IL-17D在人肺癌中频繁高表达，IL-17D高表达与患者较差的预后相关。在小鼠皮下异种移植模型中，IL-17D过表达显著促进了肿瘤生长。利用流式细胞仪，我们发现IL-17D过表达增强了肿瘤相关巨噬细胞的浸润。基于IL-17D过表达的A549细胞的表达谱，我们发现IL-17D通过MAPK信号通路上调了巨噬细胞极化和招募相关基因的表达。抑制p38通路可阻断IL-17D诱导的巨噬细胞募集。这些结果表明，IL-17D能够通过p38 MAPK信号通路来影响肿瘤免疫微环境，提示IL-17D是肺癌治疗潜在的靶点。