葛根素抑制UVB诱导的角质形成细胞凋亡的作用机制研究

Puerarin can inhibit UVB-induced apoptosis in keratinocytes and therefore have a good exploitation foreground in proventing and treating UV damage. Our pilot study proved puerarin inhibited UVB-induced opoptosis via estrogen receptor(s) and estrogen related receptor(s) in keratinocytes. However, the receptor subtypes binding puerarin and its mechanism are still unknown. Here we design a radioreceptor binding assay, a receptor expression assay, and a receptor blocking assay to comprehensively determine the receptor subtypes binding puerarin in anti-apoptosis. The result will be further proved by siRNA gene silencing technique. Subsequently we will block the related receptor subtypes and silence their genes to investigate the effects of puerarin on signal transduction pathways induced by UVB. It is the first time to study the receptor subtypes binding anti-apoptotic purarin and its mechanism. This project will supplement mechanisms of puerarin in molecular pharmacology and have significance for redeveloping its new therapeutic purposes.

葛根素能抑制UVB诱导的角质形成细胞凋亡，在防治紫外损伤方面具有良好的开发前景。我们预试验证实，葛根素作用于角质形成细胞的雌激素受体（ER）和雌激素相关受体（ERR），从而发挥其抗UVB细胞凋亡作用。然而，葛根素抗凋亡作用的结合受体亚型和作用机制仍不清楚。我们设计放射性受体结合实验、受体表达实验和受体阻断实验，以综合确定葛根素抗凋亡作用的结合受体亚型，结果再以siRNA基因沉默技术证实。随后拟通过阻断该受体亚型和沉默受体基因，研究葛根素对UVB诱导的信号传导通路的影响。本项目首次研究葛根素抗凋亡的结合受体亚型及作用机制，将补充葛根素的分子药理学作用机制，在葛根素的老药新用二次开发方面具有重要意义。

葛根素能抑制UVB 诱导的角质形成细胞凋亡，在防治紫外损伤方面具有良好的开发前景。我们预试验证实，葛根素作用于角质形成细胞的雌激素受体（ER）和雌激素相关受体（ERR），从而发挥其抗UVB 细胞凋亡作用。然而，葛根素抗凋亡作用的结合受体亚型和作用机制仍不清楚。在本研究中，我们设计放射性受体结合实验、受体表达实验和受体阻断实验，以综合确定葛根素抗凋亡作用的结合受体亚型，结果再以siRNA 基因沉默技术证实。随后拟通过阻断该受体亚型和沉默受体基因，研究葛根素对UVB 诱导的信号传导通路的影响。放射性受体结合实验结果表明，葛根素主要与ERβ、ERRβ和ERRγ有结合力，而对ERα、GPER、ERRα未显示出结合力。葛根素对ERβ、ERRβ和ERRγ的结合力大小分别为ERβ>ERRβ>ERRγ。流式细胞术提示葛根素同时作用于ER和ERR发挥抗凋亡作用，但葛根素可能还存在其它抗凋亡途径。葛根素可下调FAS、IL-1β和P38，并上调FASL，对P53没有明显影响，然而葛根素如果与氟维斯群和乙烯雌酚共同作用时，可以降低P53和升高P38的表达水平，提示葛根素同时结合ERR和ER受体从而影响P53和P38蛋白的表达。葛根素下调FAS和IL-1β可能不通过结合ERR和ER受体途径。葛根素上调FASL，与结合ERR有关。葛根素可通过降低FAS/FASL比值和降低P53抗UVB诱导的角质形成细胞凋亡。因此葛根素在抗UVB诱导的细胞凋亡中，主要结合ERβ、ERRβ和ERRγ发挥作用，结合这些受体后主要影响FAS/FASL通路。本项目首次研究葛根素抗凋亡的结合受体亚型及作用机制，将补充葛根素的分子药理学作用机制，在葛根素的老药新用二次开发方面具有重要意义。