磷是植物必需的大量元素之一,但土壤中磷浓度极低,一般低于10 uM,因此植物经常遭受低磷胁迫。我们已有的研究表明在正常条件下拟南芥中WRKY6抑制PHO1基因的表达,在磷胁迫时,WRKY6蛋白被降解从而解除对PHO1基因表达的抑制。使植物更好适应低磷胁迫。利用酵母双杂交技术筛选得到一个与WRKY6互作的E3(泛素连接酶)。构建E3基因的过量表达材料和敲除突变体后,首先在低磷胁迫条件下进行性状检测,发现E3基因过量表达材料表现较野生型耐低磷的表型;进一步的实验证明在E3基因过量表达材料中PHO1基因表达量较野生型高,而在E3基因敲除突变体中PHO1基因的表达量较野生型降低,推测E3基因可能参与WRKY6调控PHO1基因表达的这条通路中。后继实验还在进行中。
成功克隆拟南芥中的一个E3基因,通过转基因实验证明2个E3过量表达材料比野生型和突变体更加耐受低磷胁迫。Northern blot实验证明该基因受到低磷胁迫的诱导表达。利用Co-IP(免疫共沉淀)和BiFC(双分子荧光互补)技术,检测E3蛋白和WRKY6蛋白不互作。进行低磷(10uM)处理3天后的野生型、WRKY6过量表达和敲出突变体根部和叶片的总蛋白荧光差异凝胶电泳实验,其中发现有5个E3蛋白的表达量有变化,通过荧光实时定量PCR技术检测有3个基因受到低磷胁迫的诱导表达。
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数据更新时间:2023-05-31
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