荧光示踪法定位腹腔镜下宫颈癌前哨淋巴结及快速分子检测淋巴结转移

SLN biopsy has not been able to put into practice since studies (including our previous research) about sentinel lymph node (SLN) in cervical cancer has been carried out for more than 10 years. It is because that using dye or radionuclide to detect a real-time SLN intraoperatively is far from satisfaction, neither lacks a precisely quick method to detect SLN metastasis. In this study, we will use fluorescence which can penetrate 5mm tissue as guidance. Peritumoral injection with Indocyanine green (ICG) or methylene blue with Fluorescence character will be followed by near-infrared fluorescent imaging laparoscopically and then a SLN-biopsy precedure will be performed in 60 patients with cervical cancer. Each of these two fluorescent dyes' characteristics in SLN mapping will be investigated and compared to each other, and the procedure will be optimized at the same time. Moreover, we can summarize the technique of SLN biopsy. A new rapid detection system-GeneXpert will be used to determine SLN metastasis by detecting SCCA, PVA, and TACSTD1 mRNA expression intraoperatively, comparing to H&E staining, and combine with the follow-up, we can determine whether or which is a good marker in cervical cancer to detect SLN metastasis, whether is necessary for combination of them, and the feasibility of this rapid molecular diagnosis. Our study may provide a reliable basis for the next study to perform SLN biopsy in cervical cancer clinically.

宫颈癌前哨淋巴结（SLN）研究（包括我们的研究）开展已10余年，但SLN活检术始终未能付诸实践。究其原因系染料法、核素法对SLN实时定位欠理想，且缺乏术中快速准确判断淋巴结转移的方法。本研究拟采用能穿透约5mm组织的荧光示踪法，在宫颈瘤周注射吲哚花青绿（ICG）或具有荧光和染色特性的美蓝，拟首次研究腹腔镜下近红外内镜对60例宫颈癌SLN的定位成像，并施行SLN活检术，观察这两种荧光染料对SLN 定位成像特点，何者更优，并实现操作的优化，总结SLN活检术的操作技巧。术中使用一种新的GeneXpert快速检测系统定量检测SLN中 SCCA、PVA、TACSTD1 mRNA表达来判断SLN有无转移，与病理H&E染色相比较并结合预后，明确这3个指标诊断宫颈癌淋巴结转移是否合适，是否需组合检测更佳，术中快速分子检测是否可行，为下一步开展宫颈癌SLN活检术取代常规盆腔淋巴结清扫术研究提供确凿证据。

随着宫颈癌前哨淋巴结（SLN）研究意义得到证实，而荧光示踪法具有术中显像好，易识别的优点而申请本项目。但由于设备未到位，直至2016年6月我们才展开荧光法的相关研究，率先在国内展开应用吲哚青绿（ICG）作为示踪剂进行宫颈癌SLN检测，与前期使用美蓝作为示踪剂作对比，并对ICG法检测宫颈癌SLN的方法上进行优化。.至目前使用美蓝法检测腹腔镜下宫颈癌SLN共26例，另外探索研究5例使用昂贵的纳米碳作为示踪剂，与价格便宜的亚甲蓝相比并无优势。至2017年8月，曾使用美兰+吲哚青绿（ICG）联合检测4例宫颈癌SLN，未发现美蓝在近红外成像系统下有荧光成像特性，与单纯ICG法相比联合两种染料并无明显优势。完成ICG法检测宫颈癌SLN 19例，子宫内膜癌SLN 13例，阴道癌2例。初步研究发现：ICG荧光法具有术中显像清晰，定位好易识别的优点，尤其对染料法容易遗漏的罕见引流途径及深部SLN均会有良好的显示。但ICG也存在引流速度过快，而且随着时间推移会出现组织间隙弥散而影响SLN的显像的缺点。鉴于此，2017年8月开始我们创新性采用分时段注射ICG方法，至目前已进行了10例宫颈癌的研究，似乎提示较同时注射法有更高的双侧检出率和术中SLN精准显像。除文献报道的两条经典引流途径外，我们发现罕见的第3条引流路径，通过宫旁——主韧带根部——闭孔——腹股沟深。结合ICG检测SLN特点，我们提出了宫颈癌SLN诊治新思路，使用ICG荧光法先行宫颈癌SLN活检术，如证实SLN转移，则行淋巴引流区域淋巴结切除术，如SLN无转移，则仅行广泛子宫切除术。一方面有利于减瘤，另一方面明确转移淋巴结个数和部位，以利于术后个体化放化疗方案的制定。我们使用荧光示踪法对子宫内膜癌SLN进行了探索，初步取得了较好的效果，但仍需大样本研究来证实。由于试剂限制，未能按计划进行快速分子检测SLN转移的研究，仅仅对PVA、SCCA、TACSTD1 三个指标进行了SLN转移分子指标对研究，与既往我们对研究已证实SCCA相比较，未能发现更好的指标或组合。课题第2负责人王刚主任联合欧谱曼迪公司开发了国产荧光腹腔镜成像系统，2017年11月已上市并投入临床使用。