脐带间充质干细胞联合雷公藤甲素对移植物抗宿主反应的免疫调节研究

Graft versus host disease (GVHD) is known as a major complication in allogenic hematological stem cells transplantation. The key of treatment is due to suppress donor T cell proliferation and activation. MSCs have the immunoregulatory function．The main mechanism of the immnnoregulatory effect is that they could suppress proliferation of T-lymphocyte in response to stimuli．Because of their immunosuppress function，MSCs can be used widely in applications of treating Graft versus host disease （GVHD）However，it has been proved that MSC immunosuppression effect could affected by different inflammatory environment in the vivo．Triptolide is a small molecule extracted from the traditional Chinese herbal plant. Currently,triptolide has been shown to possess immunosuppressive propertiesits，however,the side effects making it unsuitable for long term application．In this research, we will evaluate Triptolide stimulated umbilical cord MSC（UC-MSC）biological activity, immunology and gene expression in vitro. we will observe Triptolide stimulated UC-MSC exert immunosuppressive effect in xeno-GVHD- model and survey the T cells proliferation, mice survival time, histopathology and the spread of signals of xenogeneic-responsive T cells using a xenogen IVIS Imaging System visually. In brief，in order to evalulate Triptolide as one of herbs immunon adjuster combine with MSCs play immunosuppressive effect for GVHD.

移植物抗宿主病（GVHD）是异基因造血干细胞移植后主要的并发症,脐带间充质干细胞(UC-MSC)对T细胞增殖的抑制作用不受主要组织相容复合物的限制，可降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应。虽然MSC在临床中被应用于预防移植物抗宿主反应，但由于体内不同炎性环境使其在发挥免疫抑制时效果并不稳定。体外研究证明中药雷公藤能有效抑制CD4、CD8淋巴细胞的增殖，减轻炎细胞浸润和抗移植排斥，但其自身的毒副作用限制了其在免疫治疗方面的应用。本项目在申请者原有研究基础上拟着重从3方面进行评估：1.雷公藤甲素对脐带WJ-MSC在细胞增殖、凋亡、细胞周期及分化功能的影响；2 体外实验中雷公藤甲素对脐带WJ-MSC免疫抑制调节及相关炎性因子的影响；3.动物实验中雷公藤甲素对脐带WJ-MSC在移植物抗宿主反应的治疗效果，探讨中药雷公藤甲素作为免疫诱导剂协同脐带WJ-MSC在体内外参与发挥免疫调节作用的机理。

移植物抗宿主病（GVHD）是异基因造血干细胞移植后主要的并发症,脐带间充质干细胞(UC-MSC)对T细胞增殖的抑制作用不受主要组织相容复合物的限制，可降低造血干细胞移植后的免疫排斥反应。虽然MSC在临床中被应用于预防移植物抗宿主反应，但由于体内不同炎性环境使其在发挥免疫抑制时效果并不稳定。体外研究证明中药雷公藤能有效抑制CD4、CD8淋巴细胞的增殖，减轻炎症和抗移植排斥，但其自身的毒副作用限制了其在免疫治疗方面的应用。在本研究中，我们体外评估雷公藤甲素（TPL）预刺激的脐带间充质干细胞（UC-MSC）的生物学活性、免疫学和基因表达。体内观察TPL预刺激的UC-MSC在异种aGVHD小鼠模型中发挥的免疫抑制作用，观察小鼠存活时间、肺，肝，肠组织的病理学改变，评价TPL作为中药免疫调节剂协同UC-MSC对GVHD的免疫抑制作用。我们的研究发现：1.0.01uM TPL预刺激的UC-MSC可保持较好的细胞活性，不影响UC-MSC表面标志物的表达，选择为最适浓度；2.与UC-MSC比较，TPL预刺激的UC-MSC出现出对CD4及CD8更明显的免疫抑制作用；3.与UC-MSC比较，TPL协同IFN-γ共同刺激UC-MSC分泌IDO，另外TPL预刺激的UC-MSC促进SOD1，SOD2，TGFβ，PD1的分泌，增强其免疫抑制作用；4.与UC-MSC比较，TPL预刺激的UC-MSC上调IL-10细胞因子；5.建立aGVHD小鼠模型，与UC-MSC比较，TPL预刺激的UC-MSC可以较好减轻小鼠肺，肝，肠的损伤。综上所诉，中药TPL可以作为免疫诱导剂协同脐带MSC在体内外更好的发挥免疫抑制作用，本研究为中西医协同的干细胞免疫疗法在GVHD的治疗上提供了创新性思路和前期基础。