cRAGE对急性缺血性卒中复发风险预测及相关机制研究

Ischemic stroke has a significant high rate of recurrence and it has become a major clinical problem to accurately predict it through simple and easy-to-measure biomarkers. In previous studies using genetic polymorphism as a biomarker, the applicant only found that PDE4D was correlated to poor outcomes but not to recurrence of ischemic stroke. Recently, some studies have found that cRAGE, cleaved receptor for advanced glycation end products, is not only associated with common risk factors of stroke such as atherosclerosis, hypertension, diabetes, and atrial fibrillation, but also with poor outcomes of acute ischemic stroke. To determine whether cRAGE can predict the recurrence of acute ischemic stroke and to clarify its related mechanisms, we intend to use the clinical information and sample database of China National Stroke Registry III to detect serum levels of cRAGE by ELISA, and to determine whether cRAGE is predictable to stroke recurrence by Cox regression. A mouse model of recurrent photothrombotic stroke was used to determine the effect of cRAGE on recurrent lesion size and immunohistochemistry, flow cytometry, and ELISA techniques were performed to detect the type, number and functional states of macrophages which expressed surround the recurrent lesions and in serum and finally to clarify whether cRAGE reduces recurrence rate of stroke by inducing differentiation of macrophages to M2 subtype.

缺血性卒中具有显著的高复发率，如何通过简单易测的生物标记物准确预测复发是临床面临的一大难题。申请人前期通过基因多态性作为标记物的研究仅发现PDE4D与缺血性卒中不良结局紧密相关，但与复发无关。新近研究发现，cRAGE（裂解型糖基化终末产物受体）不仅与动脉粥样硬化、高血压、糖尿病和房颤等脑卒中常见危险因素的发生相关，还与急性缺血性卒中不良结局显著相关。为明确cRAGE是否可预测急性缺血性卒中复发及其可能机制，本课题拟利用“国家卒中登记Ⅲ”临床信息及样本资源库，通过ELISA检测血清cRAGE水平，通过Cox生存曲线分析cRAGE是否可预测卒中复发。利用光化学诱导的小鼠脑卒中复发模型，明确cRAGE对复发病灶大小的影响，分别采用免疫组化、流式细胞检测及ELISA技术明确复发病灶周围及血清中巨噬细胞表达类型、数量及功能变化，明确cRAGE是否通过诱导巨噬细胞向M2型分化的机制而降低卒中复发。

缺血性卒中具有高复发率、高致残率和高死亡率，在脑血管病中所占比例已超过80%，如何通过简单易测的生物标记物准确预测复发是临床面临的一大难题。既往研究发现，cRAGE（裂解型糖基化终末产物受体）不仅与动脉粥样硬化、高血压、糖尿病和房颤等脑卒中常见危险因素的发生相关，还与急性缺血性卒中不良结局显著相关。本研究主要内容为（1）证实血清cRAGE水平下降能够预测急性缺血性卒中患者临床复发；（2）阐释cRAGE促进巨噬细胞向M2型分化、降低卒中复发的分子机制。.第一部分（临床部分）的研究数据主要来源于“国家卒中登记（CNSR-3）”，通过对血清sRAGE、esRAGE等原始指标的检测和计算，同时利用Cox生存曲线分析，结果证实，cRAGE并不能预测急性缺血性卒中的临床复发（HR=0.99-1.14，p均>0.44），反而却能良好预测缺血性卒中的临床结局。相较于较低血清浓度的cRAGE，较高浓度血清cRAGE的患者其90天发生不良结局（改良Rankin量表2-6分）的风险约下降23%-24%（HR=0.76-0.77，p均<=0.05），1年发生不良结局的风险约下降23%-39%（HR=0.61-0.77，p均<0.05），这一研究与既往已有研究结果相一致。在此基础上，研究组调整了第二部分机制研究内容，利用小鼠的大脑中动脉永久闭塞模型（dMCAO）初步探索了cRAGE在dMCAO小鼠中的血清变化水平，并在被阿司匹林联合氯吡格雷药物治疗过的小鼠血清中发现cRAGE水平显著升高，这为探索阿司匹林联合氯吡格雷药物治疗改善患者临床结局的可能机制提供了重要理论依据。.本研究所发现的cRAGE可良好预测缺血性卒中临床结局的结果将为未来的神经保护靶点及潜在机制研究提供一定的理论依据。.