NK、NKT细胞在HCV增强肝损伤敏感性、抑制肝再生中的作用机制研究

NK细胞和NKT细胞为代表的肝脏天然免疫细胞不仅在免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用,还积极参与调节肝损伤和再生的动态平衡。丙型病毒性肝炎是威胁人类健康的严重问题，在受到外界不良因素作用后肝脏损伤及再生的平衡状态极易受损。有研究表明，NK细胞和NKT细胞的功能受损是形成HCV慢性感染的关键因素。但NK细胞、NKT细胞在丙肝患者肝损伤及肝再生过程中的作用及其机制尚不明确。基于此，我们提出假设："NK细胞、NKT细胞与HCV增强肝损伤敏感性、抑制肝再生相关"，并设计实验，验证假设。为此本课题组基于前期所建立的HCV小鼠体内稳定表达体系，结合肝脏再生模型及自身免疫性肝损伤模型，来验证肝脏NK和/或NKT细胞是否直接参与HCV增强肝损伤敏感性、抑制肝再生的过程，并进一步阐明其分子机制，为解释HCV所致肝脏疾病的发生机制提供科学依据。

以NK 、NKT 细胞为代表的肝脏天然免疫细胞不仅在免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用,还积极参与调节肝损伤和再生的动态平衡。丙型肝炎患者在受到外界不良因素作用后肝脏损伤及再生的平衡状态极易受损，但NK 细胞、NKT 细胞在丙肝患者肝损伤及肝再生过程中的作用及其机制尚不明确。基于此，探索肝脏NK 、NKT 细胞与HCV 增强肝损伤敏感性、抑制肝再生的相关性并阐述其分子机制是本研究的重要目的。具体研究内容概括如下：.（1） HCV 基因组肝脏长期表达小鼠模型：结合水动力转染技术、密码子优化的噬菌体整合酶和活体荧光成像技术，基于免疫功能正常的C57BL/6小鼠，建立了可视化的HCV肝脏特异性长期表达小鼠模型。.（2） HCV对小鼠肝脏免疫细胞的影响：以上述模型为基础，首先分析HCV 表达对肝脏免疫细胞的影响，结果显示：HCV 降低了小鼠肝脏NK 细胞的数量，但不影响其活性； HCV 对小鼠其他类型的肝脏淋巴细胞（NKT、T等）未造成显著影响。这一结果与临床报道相似。.（3） HCV促进小鼠肝脏免疫损伤的机制研究：基于该HCV 小鼠模型，结合Con A 诱导的自身免疫性肝损伤模型，对HCV 免疫致病机理进行探索。结果显示HCV促进ConA介导的肝脏免疫损伤与小鼠肝脏NK 细胞的过度活化相关。进一步研究显示，肝脏NK 细胞免疫功能过度激活依赖于NK 细胞表面激活性受体NKG2D 及其胞内与其免疫活性密切相关的细胞因子（IFN-γ、TNF-α 等）的表达。同时，NKG2D 在肝细胞表面的配体NKG2DL(H60)的表达水平也显著上调。.（4） HCV抑制肝脏再生的机制研究：应用HCV全基因组表达小鼠模型为基础，70%肝切除实验构建肝脏再生模型，对HCV抑制肝脏再生的致病机理进行探索。本研究未发现肝脏免疫细胞参与HCV抑制肝再生的直接证据，但发现HCV能够抑制STAT3的表达并抑制其磷酸化，从而抑制其下游靶基因SOCS3的活化，抑制肝细胞进入增殖周期。.综上所述，本研究从肝脏天然免疫系统角度部分解释了HCV和肝脏免疫细胞间的相互关系，对HCV急慢性感染的防控及HCV导致的肝脏疾病的治疗具有一定的理论意义。