基于NAAA-PEA途径的藏药水母雪莲内生真菌的镇痛抗炎物质基础研究

Some researches indicate that endogenous cannobinoids participate in establishing analgesia tone, and they can ease pain in the peripheral tissue and cetral nervous system. PEA is an important endogenous cannobinoid for analgesia and anti-inflammatory effects. However, it is hydrolyzed easily by NAAA in many tissues and its anti-inflammatory functions are hindered simultaneously. Thus, if the activity of NAAA is inhibited, it should be one of the efficient way for analgesia and anti-inflammatory effects to keep PEA's normal level. This proposal is to discover the novel, analgesia and anti-inflammatory secondary metabolites quickly from endophytic fungi （TPF15 and TPF26）of Saussurea medusa, using bio-guided methods by UPLC-QTOF-HRMS and NMR analysis. A chemical epigenetics approach is applied to aquire more bioactive novel metabolites by adding the inhibitor of enzyme to culture media. The SAR will be discussed among the active compounds in order to discover the potent inhibitors of NAAA. This proposal is not only significant for discovering the inhibitors of NAAA from two strains of fungi, but also the basis for developing the analgesia and anti-inflammatory drugs.

疼痛与炎症一直以来为医学界所关注。研究表明内源性大麻素参与建立体内镇痛体系，能够在外周组织和中枢神经系统中显著地缓解疼痛发生。PEA是一种重要的镇痛抗炎作用的内源性大麻素，但它在许多组织中易被NAAA 酶水解代谢而阻碍了其对抗外周炎症的功能。因此抑制NAAA活性，使PEA维持正常生理水平是治疗外周疼痛与炎症的有效途径之一。本项目旨在UPLC-QTOF-HRMS、NMR等指导下，通过活性跟踪方法从雪莲内生真菌TPF15和TPF37发酵液中快速发现结构新颖且具有镇痛抗炎作用的次级代谢产物；并采用化学-表观遗传学方法，通过在培养液中加入酶抑制剂，获得更多新颖的活性代谢产物；通过对得到的单体化合物活性测试结果探讨其构效关系，进而从雪莲内生真菌中发现NAAA抑制剂。本项目不仅在阐明2株内生真菌中NAAA抑制剂的快速发现上具有重要科学意义，而且可为镇痛抗炎药的研发提供新型物质基础。

水母雪莲花为菊科植物水母雪莲花（Saussurea medusa）的干燥全草，它作为极具药用价值的民族药，药用历史悠久，具有广泛的生物活性。本项目以UPLC-QTOF-HRMS和NMR分析结果为指导，通过抗炎、抗肿瘤等活性跟踪的方法，并运用溶剂法和各种色谱方法（硅胶柱色谱、ODS色谱、凝胶色谱、HPLC色谱等），已从4株雪莲内生菌（TPF15，19，20，37）发酵液中快速分离活性单体化合物，再根据理化性质、谱学方法（UV、IR、1H NMR、13C NMR、2D NMR、MS、ORD、CD等）等方法解析单体化合物的化学结构，包括确定其相对构型和绝对构型。采用化学-表观遗传学法（chemical epigenetic approach），在真菌培养液中加入组蛋白去乙酰化酶抑制剂（TSA），并通过溶剂法和各种色谱方法分离纯化这些活性次级代谢产物。已从4株内生真菌中分得40余个化合物，其中新化合物12个，并且多数化合物具有较强的抗炎与抗肿瘤活性。本项目不仅在阐明水母雪莲内生真菌中活性先导化合物的快速发现上具有重要科学意义。