微量赤霉素的原位在线CE-SPR/LIF-MS分析方法

微量复杂赤霉素（GAs）的分离鉴定一直面临样品消耗多、检测压力大、分离困难等三大挑战，我们在培育项目中较好解决了分离问题，实现了20种GAs标准的高效分离。本申请欲在此基础上，以样品的选择性预处理为突破口来统筹解决前两项挑战。拟从发现针对活性GAs的选择性化学反应入手，来构建出能原位衍生、原位富集和纯化GAs的样品预处理新方法，并经原位反应方法的改进和拓展，向GAs引入紫外、荧光或易离子化等功能基团，进而构建出微量GAs的高效毛细管电泳（CE）-激光诱导荧光/紫外检测、原位质谱测定、色-质联用分析等新方法，同时完善表面等离子体共振（SPR）与成像分析方法，探索发展CE-SPR新方法，以最终实现对10-1000 nmol/L GAs的高效分离与鉴定、对微量活性GAs分子与其互作蛋白识别过程的动态研究，为"植物激素作用的分子机理"重大研究计划提供新的方法学支持。

植物体中的赤霉素（GAs）由于异构体多、性质不够稳定、浓度低、可检测基团少且难以有效衍生，所以其分析测定难度大，赤霉素识别过程研究更加困难。本项目旨在发展耗样少的高效快速分离与鉴定技术，以及免标记的识别反应过程的动态分析方法。经过研究，取得了3个突破和4项重要进展。三个突破是：1）突破超低浓度化学反应的困难，建立了1pmol/L级超痕量GAs衍生新方法；2)突破仪器制约，结合超痕量化学衍生，建立了可测<50mg鲜植物中20种以内GAs的高灵敏的色-质方法；3)突破了粉碎植物的制样思路，构建了直接测定鲜活植物中赤霉素的原位质谱方法。四项重要进展是：1）建立了3种GAs的选择性提取与富集方法和1种粗样高效清洁方法；2）建立了3种快速和超快速毛细管/芯片电泳（CE）方法和2种GAs的荧光衍生方法；3）建立了基于纳升电喷雾（nESI）和辉光放电（GDI）的微色谱（μLC）-质谱（MS）联用方法和装置，如μLC/CE-nESI-MS/MS、μLC/CE-nESI萃取-MS/MS、μLC/CE -GDI萃取-MS/MS、μLC/CE-GDI/nESI双萃取-MS/MS等；4）建成了GAs识别过程的动态SPR/SPRi 测定方法，以及GAs活性与含量的SPR测定方法。已发表SCI论文7篇；申请专利3项，获专利授权1项。本工作是通过与植物所合作完成的，它不仅为GAs分析提供了新的支持，也促进了分析化学与植物学研究的交叉。现已圆满完成了预定任务。