HIV感染早期病毒对髓样树突状细胞的影响及机制研究

髓样树突状细胞(mDCs)是最重要的专职抗原提呈细胞。在人类免疫缺陷病毒(HIV)感染早期，由mDCs启动的HIV特异性免疫反应的强弱决定了疾病病程。因此，探寻HIV感染早期病毒对mDCs数量、功能的影响及其作用机制对预测疾病进展具有重要意义。在HIV感染早期，病毒是否损害mDCs功能，病毒又通过何种机制影响mDCs功能，目前国外研究未得出一致结论。并且中国人群免疫遗传背景不同于欧美人群，国内外尚无对中国HIV早期感染者的相关研究报道。本研究采用流术细胞术对我国HIV早期感染者mDCs数量及功能变化进行研究，明确我国HIV早期感染者mDCs的变化。并通过体外实验明确自噬是否是HIV病毒影响mDCs的机制之一，初步探寻PI3K/AKT/mTOR这一经典信号通路在病毒影响mDCs自噬的过程中所起的作用。为进一步明确HIV的致病机制，开发以mDCs为基础的艾滋病免疫治疗提供新的靶标和依据。

本研究分析了HIV早期感染者体内髓样树突状细胞（mDCs）的数量和功能变化，发现在HIV感染早期mDCs数量较健康对照者明显减少，且病情进展快的感染者体内mDCs数量更是明显下降。mDCs数量与CD4+T细胞数量明显呈正相关，与病毒载量明显呈负相关。同时mDCs表面高表达共刺激分子CD40、CD86、CD83，但经激动剂刺激后IL-12分泌功能下降。这表明mDCs处于不完全成熟状态，不完全成熟的mDCs将诱导初始T细胞向TH2型细胞发展。体外实验证明了这一点，mDCs接触病毒后IL-12、TNF-α分泌减少，IL-10分泌增加，诱导初始T细胞向TH2型细胞发育。这些结果说明在感染早期病毒通过减少mDCs数量、降低mDCs功能，从而抑制机体内细胞免疫反应。病毒又是通过什么机制抑制mDCs功能？本研究用病毒包膜糖蛋白gp120刺激培养的树突状细胞后，采用蛋白印迹法、流式法和RT-PCR方法检测了LC3、Beclin、mTOR及p-mTOR的表达，观测mDCs的自噬水平。结果表明gp120刺激后mDCs自噬下调，但只表现为LC3-II蛋白下调，Beclin蛋白、mTOR蛋白表达无明显改变。自噬受到抑制的mDCs共刺激分子CD80、CD40表达增加，TNF-α分泌减少，这与早期感染者体内mDCs变化相似。进一步分析发现p-mTOR蛋白表达增加，推测PI3K/AKT/mTOR信号通路可能参与病毒对mDCs的自噬抑制。抑制PI3K激酶后，p-mTOR蛋白表达减少，LC3-II蛋白表达增加，说明抑制PI3K可以阻断gp120对mDCs的自噬抑制作用。综上，本研究表明HIV感染早期，病毒可通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制mDCs自噬，下调mDCs功能，进一步影响机体细胞免疫反应。本研究对HIV感染早期病毒的致病性研究具有参考价值，为以DCs为基础的疫苗研究奠定了基础。