硼替佐米序贯糖基化树突状细胞抗骨髓瘤效应及机制研究

Multiple myeloma (MM) is still not curable. The dendritic cells (DCs) immunotherapy which was considered to be a promising therapy has not appeared good effect. One of the most important reasons is the low immunogenicity of the myeloma antigen. So how to increase the immunogenicity of the myeloma antigens and increase anti-myeloma cellular immune responses of the DC vaccine have become research focus. Using the method of glycosylation engineering we changed the tumor-associated carbohydrate antigen from the myeloma cells of patients.The results showed that immunogenicity of myeloma cells enhanced obviously after transforming. It has provided the preliminary evidence in vitro that when the DCs vaccine which was prepared with glycosylation myeloma cells pulsing DCs could significantly stimulate specific T cell proliferation and had better anti-myeloma effect. And it has shown that bortezomib (BZ) also has immune regulating function, which may enhance the anti-tumor cellular immune response of DC vaccine. So in order to acquire the more intensely anti-tumor effect of glycosylation DC vaccine, we plan to perform the new sequential immunotherapy of glycosylation DC vaccine after BZ. The anti-myeloma effects will be verified in vitro MM cells from patients and in vivo mice model of myeloma.And further study will be performed on its immunological mechanisms by secretory protein chip and deep sequencing methods. We expect the new sequential immunochemical therapy can further improve the prognosis of MM.

多发性骨髓瘤（MM）目前仍不可治愈。被认为较有前途的树突状细胞（DC）免疫治疗MM至今疗效不佳的重要原因是肿瘤抗原免疫原性低。因此如何增强肿瘤抗原的免疫原性及增强DC疫苗的抗骨髓瘤细胞免疫应答是目前研究热点。我们前期采用糖基化工程的方法对MM患者骨髓瘤相关糖抗原进行了改造，结果显示改造后的骨髓瘤细胞免疫原性明显增强，并已初步证明将糖基化修饰后的瘤细胞冲击DC制备的糖基化DC疫苗可以明显刺激骨髓瘤特异性T细胞增殖并具有更好的抗瘤效应。而且硼替佐米（BZ）还具有免疫调节功能，可增强DC疫苗的抗肿瘤细胞免疫应答。为进一步获得糖基化DC疫苗更强大的抗瘤作用，我们拟在BZ治疗后序贯该糖基化DC疫苗，在体外患者来源的骨髓瘤细胞及模型小鼠体内验证其抗骨髓瘤活性，并通过分泌蛋白组学芯片及深度测序等方法对其免疫学机制进行深入研究，期望该免疫疗法能进一步改善MM患者预后。

1.项目的背景：.多发性骨髓瘤（MM）是血液系统第二常见肿瘤。在过去的二十年中，MM患者的长期生存得到了极大的提高。虽然单克隆抗体及CarT等免疫疗法的加入进一步改善了患者的预后，但是对于大多数患者，因为耐药克隆不断出现，微小残留病（MRD）持续存在等，MM仍然是不可治愈的疾病。.因此需要更深入研究MM的发病机制，发展更有效的治疗策略，克服目前疗法的不足及耐药，以进一步改善MM患者的预后。.2.主要研究内容。.本研究组完成前体N-丙酰甘露糖胺的糖基化修饰，并进行分析和鉴定，原代DC分离培养及表型鉴定，开展临床样本实验。收集MM患者BZ治疗前后外周血及骨髓标本，检测患者免疫相关分子，进行了基因表达差异试验，最后统计学检验未发现显著性差异。而在本项目有关MM细胞的体外实验研究中我们发现了前列腺素的代谢在骨髓瘤细胞系U-266和RPMI-8226中的相关作用，发现拮抗前列腺素TxA2受体TP可以使MM细胞系的增殖受到抑制，并且通过JNK和p38MAPK通路介导，揭示TP与骨髓瘤的发展相关。同时在 MM发病机制中的研究还发现长链非编码RNA（LncRNA）PRAL与MM患者预后以及硼替佐米治疗的敏感性密切相关。在研究MAPK通路时我们还发现发现EBF1基因可以通过MAPK轴调控MDS CD34+细胞的增殖和凋亡。在本项目基金支持下我们还对急性髓细胞性白血病和MDS的一些临床问题进行了相关研究，分析急性髓细胞白血病血清月桂酰胺和白三烯B4二甲酰胺水平，建立了一个急性髓细胞白血病化疗敏感性的预测模型，并申请了一个技术发明专利。.3. 重要结果、关键数据及其科学意义.本研究组在进行MM的新型免疫治疗时另辟蹊径，发现拮抗前列腺素TxA2受体TP可以使骨髓瘤细胞系的增殖受到抑制，并且通过MAPK通路中的JNK和p38MAPK通路介导；在研究MAPK通路时我们还发现发现EBF1基因可以通过MAPK轴调控MDS CD34+细胞的增殖和凋亡；对MM患者BZ治疗前后的临床样本的研究中，我们还发现长链非编码RNA（LncRNA）PRAL与MM患者预后以及硼替佐米治疗的敏感性密切相关。这些研究结果将可望为MM及MDS患者的临床诊治提供新的治疗策略和手段。