续断诱导骨同化作用的分子基础与信号转导-川续断皂苷VI对成骨特异性转录因子Cbfa1的调控

续断是中医临床常用的骨质疏松治疗药物，可促进成骨细胞增殖、表达特异性表型并合成骨基质、促进骨形成，但其调控的分子机制还不清楚。成骨细胞特异性转录因子Cbfa1在成骨细胞分化和骨形成过程中起着不可替代的调控作用。前期研究发现续断活性成分川续断皂苷VI能明显上调鼠成骨细胞中Cbfa1mRNA的表达，并且它还能显著激活Cbfa1启动子的活性。因此本研究将从川续断皂苷VI与Cbfa1间的调控关系入手，着力揭示续断促进骨同化作用的分子机制和有关信号通路。内容包括川续断皂苷VI对成骨细胞Cbfa1基因表达和活性的调节及所依赖的信号通路；BMP2、BMP7是否参与了川续断皂苷VI调节Cbfa1的表达（或活性调节）；Cbfa1在川续断皂苷VI诱导骨同化代谢过程中的作用。通过本研究，较系统地揭示续断诱导骨同化作用的分子基础，也为续断治疗骨质疏松的临床实践提供更充分的分子理论依据。

本项目研究了续断活性成分川续断皂苷VI（ASAVI）促进骨同化作用的有关机制，发现（1）ASAVI以时间和剂量依赖的方式促进成骨细胞特异性转录因子Cbfa1的表达；ASAVI通过cAMP-PKA通路促进原代成骨细胞Cbfa1mRNA和蛋白的表达。（2）构建了包含Cbfa1顺式作用元件的报告基因载体，发现ASAVI不明显增加重组报告载体转染的成骨细胞中报告基因水平。（3）ASAVI通过cAMP-PKA通路促进成骨细胞表达BMP-2 mRNA和蛋白的表达，BMP-2阻断性抗体降低由ASAVI刺激的Cbfa1表达。表明BMP-2在ASAVI调节Cbfa1表达过程中发挥重要作用。（4）构建了Cbfa1真核表达载体，发现Cbfa1 cDNA转染的成骨细胞中骨钙素 mRNA表达增加，ALP活性增强；构建了Cbfa1小干扰表达载体，发现Cbfa1基因敲减能明显减弱由ASAVI刺激的骨钙素表达和ALP活性。已发表论文5篇,培养学生2名。