β-胡萝卜素- - 虾青素转化酶定向进化及应用研究

对催化β-胡萝卜素- - 虾青素生物转化的β-胡萝卜素羟化酶和β-胡萝卜素酮化酶进行定向进化研究，提高它们在脂相溶剂中的稳定性和对E型虾青素的选择性，用进化酶转化β-胡萝卜素生产具有重要经济价值的E型虾青素。首先，用易错PCR分别突变β-胡萝卜素羟化酶和β-胡萝卜素酮化酶基因构建突变库，在脂相溶剂中用突变酶转化β-胡萝卜素，用分光光度法初筛、液相色谱法复筛获得在脂相溶剂中具有稳定活性的突变酶；用突变的β-胡萝卜素羟化酶转化角黄素，用突变的β-胡萝卜素酮化酶转化玉米黄素，用液相色谱法筛选获得对E型虾青素选择活性高的突变酶。其次，用DNA改组技术重组突变酶基因分别构建两种酶的功能嵌合蛋白库，用嵌合蛋白转化底物，用液相色谱法筛选获得在脂相溶剂中具有稳定活性、对E型虾青素选择活性高的β-胡萝卜素羟化酶与β-胡萝卜素酮化酶；研究它们的基本性质并优化其作用条件。为用酶法转化β-胡萝卜素生产虾青素奠定基础。