人胚胎干细胞表达基因hESP26的电子克隆、验证和功能研究

人胚胎干（ES）细胞具有自我复制并保持未分化状态的特性，具有广阔的应用前景，但人ES细胞这些特性的机制尚不十分清楚。我们利用高密度的基因表达芯片，比较了人ES细胞和人胚胎生殖干（EG）细胞的基因表达差异，发现一个EST序列在人ES中相对高表达，而在EG细胞中几乎不表达（经定量PCR验证）；通过搜索人EST数据库，我们用电子克隆策略和方法，克隆了一个新基因hESP26，经RT-PCR后测序验证，发现这个基因有两个转录本。该基因在ES细胞分化后表达明显下降，组织Northern Blot提示该基因在睾丸组织中表达，染色质免疫共沉淀提示OCT4和SOX2可能对其有调控，Western Blot结果提示该基因可能会影响β-catenin的表达。本申请项目拟采用慢病毒载体构建过量和抑制表达载体结合蛋白质芯片，筛选该基因是不是影响ES细胞信号通路上重要分子的表达水平，并用实验验证。