肝包虫病中差异表达lncRNA的筛选及其功能研究

Recent studies showed that lncRNA played an important role in the development of tissue fibrosis. Hydatid disease of the liver is accompanied with the occurrence of liver fibrosis in the host, suggesting that lncRNA might be involved in the development of hepatic hydatid disease. Previous experiment of the applicant has showed abnormal lncRNA expression in the pericystic layers of hepatic hydatid cyst of patients. This project intends to further analyze lncRNA expression profiles by expanding the sample size, and screen hydatid disease related lncRNA; to verify the role of selected lncRNA in the pathogenesis of hydatid disease by overexpression or interference the expression in mouse model of Echinococcus granulosus; so as to identify the target genes of selected lncRNA by bioinformatics prediction and verify by in vitro and in vivo experiments. This project would provide new theoretical and experimental basis for studying the pathogenesis and biological prevention and control of hydatid disease.

近年来的研究表明lncRNA在组织纤维化的发展过程中起重要作用，而肝包虫病的发展特别是纤维囊壁的形成也伴随着宿主肝组织的纤维化，提示lncRNA可能参与了肝包虫病的发展。申请人的前期实验也检测到了囊型肝包虫病患者的纤维囊壁中lncRNA的异常表达。因此，本项目拟在前期实验的基础上扩大样本，通过分析患者纤维囊壁中lncRNA表达水平的变化，筛选包虫病相关lncRNA；在小鼠细粒棘球蚴模型中通过过表达或干扰观察入选lncRNA在包虫病发展过程中的作用；通过生物信息学预测其靶基因，并在体外细胞实验和动物模型中鉴定其靶基因，从而为肝包虫病的发病机制研究和生物学防治提供新的理论基础和实验依据。

在该项目的支持下，我们证实了包虫囊液对肝星状细胞有明显的促增殖活化和纤维化的作用；明确了包虫囊液刺激后肝星状细胞的lncRNA表达谱，发现了多条可能调控肝脏囊周纤维化的lncRNA及相关通路。我们还对细粒棘球蚴感染早期小鼠体内巨噬细胞和树突状细胞是如何参与免疫逃逸进行了研究：1）体外实验发现，细粒棘球蚴囊液刺激树突状细胞，可以通过诱导c-Raf的磷酸化从而干扰TLR4炎症信号通路。囊液糖分子与树突状细胞C型凝集素受体结合在此机制中发挥了重要作用。2）体内实验发现，随着早期感染天数的增加，小鼠腹腔巨噬细胞逐渐由M1型转变为M2型。为了弄清细粒棘球蚴感染过程中巨噬细胞极化的分子机制，我们通过高通量测序技术和生物信息学分析筛选了在单独LPS以及囊液联合LPS刺激的条件下，巨噬细胞中表达差异明显的lncRNA。结果发现Hotairm1、Pvt1、Meg3、Dnm3os、Gas5等可能参与了囊液诱导的免疫抑制，其调控的具体分子机制正在研究过程中。3）研究发现，长链非编码RNA linc-ROR可能与新疆地区食管鳞癌组织中干细胞标志物SOX9的高表达和患者的不良预后相关。发表SCI论文5篇，均标注基金资助；申请国家发明专利1项；培养硕士研究生2名。