干燥综合征患者CD4+ T细胞中炎症相关性miRNAs筛选鉴定及其对NOD模型小鼠的免疫治疗效应

MiRNAs can regulate the activation, proliferation, apoptosis of CD4+ T cells and the functions of B cells, APC cells of SS patients, the abnormal activation of CD4 + T cells is the frist step of SS immunopathogenesis, mediating the subsequent activation of B cells and production of inflammatory mediators. Our previous studies have shown that peripheral blood CD4+ T cells of SS patients and NOD mice have abnormity of proliferation, activation and apoptosis, Microarray studies found differentially expressed miRNAs. This research based on our previous study, intend to measure miRNAs profiles of peripheral blood CD4+ T cells of healthy people and SS patients by using deep sequencing and analysis miRNAs function by using computer software, finding CD4+ T cells inflammation associated miRNAs expression profiles of SS patients, and analyze it relationship with SS clinical indexes and the percentage of each CD4+ T cells subgroups; Exploration the effect of target miRNAs on CD4+ T cell proliferation, differentiation, apoptosis and its corresponding target genes in vitro; Overexpression and inhibiting the target miRNAs in NOD mice to explore it effect on mice clinical index and peripheral blood CD4+ T cells function, providing a theoretical basis for subsequent therapeutical experiments.

MiRNAs对SS患者CD4+ T细胞的活化、增殖、凋亡及B细胞、APC细胞等功能均有调节作用，CD4+ T细胞的异常活化是SS免疫病理的始动环节，介导了后续的B细胞活化与炎症介质的产生。我们的前期研究显示SS患者与NOD模型小鼠外周血CD4+ T细胞存在增殖、活化与凋亡的异常，微阵列研究发现有差异显著的上调与下调miRNAs表达谱。本课题在前期研究基础上，拟对pSS患者和健康人外周血CD4+ T细胞miRNAs进行深度测序与计算机软件功能分析，找出SS患者CD4+ T细胞炎症相关性miRNAs表达谱，并分析其与SS临床特征和CD4+ T细胞亚群比例的关系；体外探索目标miRNAs对CD4+ T细胞增殖、分化和凋亡功能的影响及其相应的靶基因；运用NOD模型小鼠探索过表达与抑制表达的目标miRNAs对小鼠临床指标和外周血CD4+ T细胞增殖分化功能的影响，为后续的治疗性实验提供理论基础。

miRNAs对干燥综合征（SS）患者CD4+T细胞的活化、增殖、凋亡及B细胞、APC细胞等功能均有调节作用，CD4+T细胞的异常活化是SS免疫病理的始动环节，介导了后续的B细胞活化与炎症介质的产生。.我们通过miRNA谱和生物信息学对MSCs处理的静止和T细胞受体(TCR)激活的CD4+ T细胞进行miRNome分析。共培养72 h后， pSS初始组(与健康初始组相比)、pSS激活组(与pSS初始组相比)、MSC治疗组和IFN-γ预处理MSC治疗组(与pSS激活组相比)中异常miRNA的数量分别为42、55、27和32。基因富集分析显示259条通路与CD4+ T细胞刺激相关，240条通路与MSC治疗相关。通过MSC治疗，pSS患者激活的CD4+ T细胞中增加的miRNA-7150和miRNA-5096以及降低的miRNA-125b-5p和miRNA-22-3p水平得到逆转。CD4+ T细胞和CD4+ IFN-γ+细胞的增殖、CD4+ T细胞中miRNA-125b-5p和miRNA-155的表达水平以及上清IFN-γ的分泌与疾病活动度相关。miRNA可能在MSC治疗活化的CD4+ T细胞中发挥重要作用。结果表明，TCR激活的pSS患者CD4+ T细胞中miRNA-125b-5p和miRNA-155的表达水平可能为自身免疫性疾病的研究提供了线索，并为前瞻性治疗提供了一个新的靶点。此外，我们通过MSC治疗干燥综合征小鼠模型，发现小鼠的唾液腺功能得到改善。我们的结果对于提供MSC治疗pSS可能是至关重要的。