PEDF受体的鉴定及在心肌梗死中作用机制的研究

According to recent research, pigment epithelium-derived factor (PEDF) has lots of functions in cardiovascular disease. In our previous study, we had found that paracrine factor PEDF plays a critical role in the regulatory effects of old MSCs against MI. The impaired therapeutic ability is predominantly caused by increased PEDF secretion. Besides that, PEDF can regulate the function of smooth muscle cells. While,no receptors of PEDF (PEDF-R)had been found at cardiac.But,we had recently found the recognized protein of PEDF-R (LR and PLA2) at cardiocyte and cardiac fibroblast. However, we were uncertain that protein was the PEDF-R at cardiac.Hence, we would to determine the PEDF-R at cardiac through yeast two-hybrid, and identify the functuon of it by Co-IP and other biological effect at cardiocytes and rat MI.

近年来色素上皮衍生因子（PEDF）在心血管疾病中的研究成果显著，结合PEDF在心血管疾病中的基础实验和临床研究，我们的前期研究已经证实：细胞旁分泌的PEDF在治疗MI的过程中发挥重要作用，PEDF的靶向基因改造在提高衰老MSCs疗效过程中起到关键性作用;并且发现PEDF可以调节血管平滑肌细胞的功能;当前，在心脏还未发现PEDF的受体，而我们近期研究表明，在心肌细胞和心脏成纤维细胞均有PEDF的已知受体（LR和PLA2）蛋白；但是，并不能确定其为PEDF在心脏的受体。因此，本课题组拟在前期结果的基础上，拟通过酵母双杂交试验鉴定PEDF在心脏的受体(PEDF-R)，通过Co-IP和在体动物MI模型探讨PEDF-R对MI心脏功能的影响及其生物学作用，并进一步阐明PEDF-R对心肌细胞和MI的影响过程。

背景：近年来色素上皮衍生因子（PEDF）在心血管疾病中的研究成果显著，结合PEDF在心血管疾病中的基础实验和临床研究，我们的前期研究已经证实：细胞旁分泌的PEDF在治疗MI的过程中发挥重要作用，PEDF的靶向基因改造在提高衰老MSCs疗效过程中起到关键性作用;并且发现PEDF可以调节血管平滑肌细胞的功能;当前，在心脏还未发现PEDF的受体，而我们近期研究表明，在心肌细胞和心脏成纤维细胞均有PEDF的已知受体（LR和PLA2）蛋白；但是，并不能确定其为PEDF在心脏的受体。.内容：本课题组拟在前期结果的基础上，拟通过酵母双杂交试验鉴定PEDF在心脏的受体(PEDF-R)；验证PEDF已知受体PLA2和LR在心肌细胞的存在、定位及功能。..重要结果：.历经3年探索，取得了以下成果。..1、已经完成了PEDF受体的酵母双杂交筛选：pGBKT7-PEDF重组质粒的构建与鉴定，诱饵 蛋白自激活性及其对AH109酵母毒性的检测，文库质粒的转化及共转化效率的测定和阳性 克隆的酶切鉴定，文库滴度测定和共转化子高严谨性筛选的回转验证，候选阳性克隆的测序，对酵母双杂交的阳性克隆进行了测序，经离体细胞real-time PCR验证和进一步的筛查，目前发现三个相关的基因序列金属硫蛋白、白蛋白、死亡盒子多肽-46具有模型的相关性。.2、PEDF在低氧条件下对心肌细胞的影响：诱导心肌细胞凋亡，PEDF影响心肌细胞凋亡功能的分子信号通路：Fas信号。.3、PEDF受体在心肌细胞的存在：PLA2和LR，PEDF受体在心肌细胞的定位：细胞膜。.4、低氧影响PEDF受体在心肌细胞的表达：PLA2和LR表达升高，siRNA干扰PEDF受体在心肌细胞的表达。.5、PLA2表达下调通过Fas信号途径抑制PEDF诱导的心肌细胞凋亡。.6、Li JK, et al. PEDF Promotes Fas-Induced cardiomyocytes apoptosis via its receptor PLA2. Life Sci. 2014 Mar 18;99(1-2):18-23.SCI.7、李继科 等《PEDF促进心肌细胞凋亡的受体和作用机制研究》参选全军胸心血管外科学术大会青 年优秀论文，申请者进行了课题汇报大会发言。