原发性干燥综合征中调节性B细胞功能缺陷及TACI对其调控机制研究

Primary Sjogren’s syndrome (pSS) is a chronic autoimmune disorder that typically affects exocrine glands-mainly labial and lacrimal. Our previous study revealed that the phenotype and function of peripheral blood B cell subsets were abnormal in pSS patients, especially the regulatory B cells (Breg). Breg cells could down-regulate immune response by IL-10 secretion, but the IL-10 level secreted by Breg cells was reduced in pSS patients, and meanwhile the transmembrane activator, calcium modulator and cyclophilin ligand interactor (TACI) on the Breg cells were down-regulated. The objective of this research is to elucidate the complicated functional deficiency of Breg cells with IL-10 and the interaction with T cells in pSS patients, then to investigate whether and how Breg cells fail to regulate the hyper-responsiveness of inflammation in pSS patients and if the absence of TACI is the key point in the Breg cells development and excitation. We then will further verify in vivo how the BAFF-TACI-AP-1-IL-10 pathway regulating the function of Breg cells in the experimental SS mouse model. The research may help to explicit the immune-regulatory role of B cells in pSS and it will be the experimental basis of new optimal treatment to pSS patients.

原发性干燥综合征（pSS）是以外分泌腺受累为主的慢性自身免疫性疾病，主要表现为B细胞高度活化。课题组前期研究发现pSS患者B细胞亚群存在偏倚，调节性B细胞（Breg）比例显著增加，但其所分泌具有抑炎作用的IL-10水平下降，同时其表面跨膜蛋白活化因子钙离子信号调节亲环素配体耦合子（TACI）表达下调。本课题将以上述发现为切入点，探讨是否由于Breg细胞TACI表达下调，B细胞活化因子（BAFF）不能通过其促进Breg细胞核转录因子激活蛋白1（AP-1）活化，进而导致IL-10转录及合成减少，致使Breg细胞不能有效发挥对T细胞的调控，不能有效迁移至炎症组织中发挥抑炎作用。同时课题组拟在pSS小鼠模型中利用体内试验进一步证实BAFF-TACI-AP-1-IL-10这一环节受损对Breg细胞调节功能的影响，并且TACI是该环节的关键因子。期望上述发现能够对pSS靶向治疗提供新的思路。

背景与目的： 干燥综合征是一种主要累及泪腺和涎腺等外分泌腺的慢性自身免疫病， 越来越多的研究表明 B细胞处于SS发病机制的核心地位。拟探讨 B 细胞TACI的表达水平，在SS中的作用以及可能的信号转导通路。方法：纳入于初治SS患者34例，健康对照者37例。分析各组B细胞亚群、TACI及相关受体的表达。通过流式分析B细胞亚群、跨膜TACI表达、可溶性TACI的浓度性。通过 siRNA敲低、sTACI类似物干预条件下，检测B细胞增殖、分化及对Treg调节能力。筛选并确定与TACI相关且表达量显著改变的 miRNA，筛选其靶基因并通过 miRNA 过表达及抑制实验在 B 细胞内验证二者的靶关系并探索相关的信号通路。结果：SS 患者外周血 B 淋巴细胞亚群存在显著性偏倚，Breg细胞比例增高，但分泌IL-10功能受损。TACI被敲低约 50%时，B细胞增殖活性显著提高，细胞分化受阻，Breg细胞本身及诱导Treg细胞分泌IL-10的能力显著受损。泰它西普干预时TACI 表达增加，培养上清IgG浓度降低，IgA 浓度升高。TACI与hsa-miR-30b-5p具有良好相关性，该miRNA在SS的B细胞内显著下调，体外抑制其表达可致细胞分化受阻、 Breg 细胞分泌 IL-10 的能力受损；结合数据库筛选并在B细胞内过表达及抑制hsa-miR-30b-5p验证其靶基因为SMAD1，进一步靶向过表达或抑制SMAD1的转录后，TGF-β/Hippo 信号通路下游ID2的转录可相应上调或下调。结论：SS患者外周血B细胞表面跨膜TACI表达缺陷，其与hsa-miR-30b-5p表达下调密切相关，或可通过激活其靶基因 SMAD1 介导的 TGF-β/Hippo 通路参与SS 的发病。TACI 可能成为 SS 治疗的潜在有效靶点。.__________________________