Notch信号通路在低氧诱导小鼠胎盘sFlt1表达中的作用机制

先兆子痫是一种严重的妊娠高血压，临床表现为身体肿胀、血压高、蛋白尿等症状，其发病率高，对母儿危害严重，成为国际生殖健康研究领域极为关注的热点问题。近年来，国内外对先兆子痫发病机制的研究已经取得了很大进展，发现低氧诱导胎盘sFlt1表达异常升高是造成先兆子痫的关键环节。然而，调节sFlt1表达的分子机制仍不清楚。申请人预实验结果显示，Notch信号通路在低氧诱导胎盘sFlt1表达异常升高过程中可能发挥着关键作用。申请人拟利用胎盘特异性Notch2超表达及RBPj基因敲除小鼠、小鼠滋养层干细胞系以及腺病毒制备的先兆子痫动物模型为研究对象，深入研究Notch信号通路在低氧诱导胎盘sFlt1表达中的分子机制，为阐明先兆子痫发病机理以及对该病的诊断、治疗和预防提供新的策略和突破口。

为探索Notch信号通路在低氧诱导小鼠胎盘sFlt1表达中的作用机制，本研究首先利用原位杂交方法检测了Notch信号通路相关分子、sFlt1及Flt1在小鼠胎盘不同时期的表达变化，结果显示sFlt1及Flt1与Notch2及Rbpj有相同的表达模式。低氧处理正常小鼠孕鼠及胎盘特异性敲除Rbpj小鼠孕鼠，结果显示低氧处理后，正常小鼠胎盘胎儿血管侵润较浅，滋养层细胞数目减少，细胞增殖减弱；而胎盘特异性敲除Rbpj后，滋养层细胞中TGC细胞数目相对增多，胎儿血管侵润浅。胎盘特异性敲除Rbpj后，sFlt1及Flt1表达显著降低；CoCl2处理小鼠滋养层干细胞模拟低氧环境对小鼠滋养层干细胞分化以及对sFlt1表达的影响，结果显示细胞内NICD表达增加，这标志Notch信号通路被激活；当用DAPT阻断Notch信号通路，CoCl2抑制滋养层干细胞分化的程度得到缓解，同时sFlt1表达显著下降。后续研究将利用双荧光素酶报告系统和定点突变系统研究Rbpj在调节sFlt1启动子区中的作用机制。本研究还利用Zp3-cre和Prm-cre工具鼠实现Rbpj全部敲除，导致胎儿死亡，胎盘发育异常，胎盘发育异常主要体现在尿囊和绒毛膜融合异常，以及胎盘内TGC细胞显著增多，本研究利用四倍体补偿和构建Rbpj敲除滋养层干细胞系进行了初步探索。