改良超长方案改善PCOS合并胰岛素抵抗患者子宫内膜容受性机制的初步研究

NF-κB pathway activation-induced endometrial insulin resistance was one of the causes of infertility patients with PCOS and insulin resistance whose endometrial receptivity is declined . Our previous findings indicated that the use of modified utral-long protocols ( GnRH-a was used twice in mid-luteal phaes) can improve clinical outcomes by improving endometrial receptivity in patients with PCOS , but the mechanism was not clear. Previous research also found that GnRH-a reduced the activity of NF-κB pathway in endometrial stromal cells and depended the dose and time. Thus, our subject will try to establish the animal model of PCOS and insulin resistance which applicate GnRH-a or transfect NF-κB inducing kinase RNAi adenovirus particles to explore the influence of NF-κB pathway activity 、the state of insulin resistance and embryo implantation rate ;then we will investgate GnRH-a whether reduce NF-κB pathway activity-induced insulin resistance and ultimately improve endometrial receptivity by using GnRH-a or the NF-κB inhibitor in endometrial stromal cells in infertility patients with PCOS and insulin resistance in vitro. Our research attempt to provide ideas for seeking inflammatory medication target in assisted reproductive technology in patients with PCOS by exploring the immune mechanism of GnRHa on improving the endometrial receptivity .

NF-κB通路活化诱导的子宫内膜胰岛素抵抗是PCOS合并胰岛素抵抗不孕患者子宫内膜容受性下降的原因之一。我们对PCOS患者应用改良超长方案的既往研究结果提示：改良超长方案（两次黄体中期使用GnRH-a）可能通过改善PCOS患者子宫内膜容受性而改善临床结局，但具体机制尚不清楚。亦有相关研究发现：GnRH-a作用于子宫内膜基质细胞降低NF-κB通路活性且呈时间、剂量依赖性。由此，本课题通过建立PCOS合并胰岛素抵抗动物模型应用GnRH-a、NF-κB诱导激酶RNAi腺病毒颗粒转染后并对PCOS合并胰岛素抵抗的不孕患者子宫内膜基质细胞应用GnRH-a、NF-κB抑制剂体外培养后，尝试了解GnRH-a是否通过降低人体子宫内膜NF-κB通路活性而调节子宫内膜胰岛素抵抗并最终改善子宫内膜容受性,为寻求辅助生殖技术药物治疗的分子靶点提供思路。

多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome，PCOS) 是一种病因复杂的内分泌代谢紊乱性疾病，往往伴随子宫内膜容受性下降，核转移因子（NF）-κB通路激活导致的子宫内膜胰岛素抵抗是潜在的发病机制之一。既往研究提示改良超长方案使用的GnRH-a可以调节子宫内膜基质细胞NF-κB活性，并存在时间、剂量依赖性。在辅助生殖助孕过程中使用改良超长方案改善助孕结局可能在于改善子宫内膜容受性。我们设想：在改良超长方案应用时，GnRH-a是否可能通过调节NF-κB通路激活诱导的胰岛素抵抗而调节子宫内膜容受性。.首先，通过探索PCOS患者子宫内膜容受性转录组学分析是否存在差异。其次，对比输卵管因素不孕患者和PCOS合并胰岛素抵抗患者子宫内膜NF-κB活性,并探索NF-κB通路激活诱导的子宫内膜胰岛素抵抗状态。通过子宫内膜转录组学分析发现对照组患者与PCOS患者子宫内膜转录组学基因差异性表达（差异表达基因n=1810）。对差异基因进行KEGG pathway分类发现，细胞组成过程中运输和分解代谢涉及的差异基因数最多；在人类疾病的内分泌代谢疾病中（差异表达基因数n=26）主要参与胰岛素信号通路，胰高血糖素信号通路，胰岛素抵抗及糖合成与代谢。而通过Western blot检测不同细胞组份中的NF-κB蛋白水平后发现，对照组1/3、PCOS合并IR组2/3的病人，其内膜细胞检测到有部分p65转入核，提示这些病人的内膜细胞中NF-κB通路为激活状态。通过RT-PCR和Western blot检测分析NF-κB通路激活状态下子宫内膜炎症因子（IL-1β，IL-6,TNF-a）的表达并无明显异常，相应子宫内膜胰岛素抵抗（GLUT-4）及子宫内膜容受性生化标志物（LPAR3）并无明显差别。. 从目前数据结果可以看出PCOS合并胰岛素抵抗患者子宫内膜转录组学差异、子宫内膜NF-κB激活。而这种差异从目前数据看与子宫内膜炎症因子表达量及胰岛素抵抗指标无明显相关性。目前转录组数据结果提示PCOS患者子宫内膜容受性下降考虑与子宫内膜糖代谢有关，具体涉及糖代谢的何种调控是后续研究需要深入探索的。