绿茶提取物EGCG对青光眼视神经保护作用的实验研究

神经科学领域的最新研究证实，绿茶提取物EGCG可以通过抗氧化损伤、清除自由基、阻断细胞凋亡通路、抗炎和抑制谷氨酸毒性作用等多种途径实现对中枢神经元的保护。视神经在发育结构上属于中枢神经系统，那么EGCG是否对视神经也具有同样的保护作用？本课题提出如下假说：EGCG可以抑制青光眼视网膜神经节细胞（RGC）死亡，阻止视神经继发性损害过程，从而具有防治青光眼视神经进行性损伤的作用。为验证该假说，本实验将采用不同的给药方式，观察EGCG对大鼠慢性高眼压模型和视神经钳夹伤模型RGC及其轴突的保护作用，同时观察ECGC 对RGC上位神经元活性的影响。基于观察的结果，课题组将对EGCG在视神经保护中的作用进行综合评价。鉴于目前尚无通过视神经保护降低青光眼致盲率的专门药物，本课题研究将有可能为这类药物的寻找奠定基础，同时为其他类型的视神经疾病以及与氧化损伤有关的视网膜疾病的防治研究提供重要的借鉴。

第一部分：目的 全身应用绿茶提取物EGCG是否对大鼠视神经钳夹伤后不同时期视网膜神经节细胞（RGC）具有保护作用。方法Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组）、假手术+EGCG组（B组）、视神经钳夹+生理盐水组（C组）、视神经钳夹+EGCG组（D组）4组，B、D组全身予EGCG。C组以生理盐水替代EGCG。采用3%荧光金经上丘逆行标记RGC方法，比较各组视神经钳夹伤后7、14、28 d RGC的数量；采用免疫组织化学染色及western blot检测各组视神经组织神经丝蛋白（NF-L）及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果 各时间点D组RGC存活数量均显著高于C组（P＜0.05），NF-L表达均高于C组，GFAP表达均低于C组。结论 EGCG对大鼠视神经钳夹伤后RGC具有一定的保护作用。.第二部分：目的EGCG是否对大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体（LGN）神经元具有保护作用。方法 视神经钳夹伤后7、14、28 d，尼氏染色计数dLGN 神经元、观察LGN NF-L及GFAP的表达程度，并计数nNOS阳性细胞。结果 视神经钳夹伤后4w，EGCG能够明显提高LGN神经元存活数量，提高NF-L表达，降低nNOS表达。结论 EGCG对大鼠视神经钳夹伤4周后外侧膝状体的神经元丧失具有一定的保护作用，这种保护作用可能与EGCG抑制了nNOS的表达有关。.第三部分：目的 探讨EGCG对N-甲基天冬氨酸（NMDA）所致的视网膜兴奋性毒性的潜在保护作用。方法 Wistar大鼠被随机分为正常对照组，PBS对照组（玻璃体腔内注射PBS），NMDA对照组（玻璃体腔内注射NMDA，腹腔注射生理盐水），NMDA实验组（玻璃体腔内注射NMDA，腹腔内注射EGCG，25mg/kg）。观察时间点为玻璃体腔内注射后12小时，1、2、3、7及14d。分别计数RGC层的神经元数目，测量Thy-1免疫阳性层的厚度以及通过RT-PCR测量Thy-1 mRNA的表达量。结果 在所有的观察时间点，NMDA对照组的神经节细胞密度、Thy-1免疫阳性细胞层的厚度以及Thy-1 mRNA的表达明显低于NMDA实验组（P<0.05）以及PBS对照组和正常对照组。结论 腹腔内注射EGCG可见明显降低NMDA所致的RGC的损伤。