辛温通阳中药诱导PGC-1α活化非酒精性脂肪肝线粒体代谢的研究

基于线粒体代谢在NAFLD病理机制中作用的研究进展，结合我们既往以辛温通阳中药葱白及葱白提取物抗NAFLD的疗效基础，同时前期研究发现辛温通阳中药葱白提取物治疗NAFLD大鼠后，肝细胞脂肪变性的减轻与PGC-1α的高表达相关。本项目拟采取体内实验和体外实验的方法，以脂肪乳灌胃法建立NAFLD大鼠模型，用脂肪乳剂培养诱导体外肝细胞脂肪变性，观察辛温通阳中药干预前后NAFLD线粒体代谢活动的变化，检测线粒体代谢关键基因PGC-1α、NRF、mtTFA、COX-II、CPT-1、PEPCK和G-6-Pase的表达水平，动态观察ROS水平，采用RNA干扰技术抑制PGC-1α的表达，观察药物在PGC-1α失活状态下，对线粒体合成及糖脂代谢限速酶的影响。该研究对于明确PGC-1α调节线粒体代谢功能的具体分子靶点及为辛温通阳中药治疗NAFLD提供理论依据等都具有十分重要的科学意义。

基于线粒体代谢在NAFLD病理机制中作用的研究进展，结合我们既往以辛温通阳中药葱白及葱白提取物抗NAFLD的疗效基础，同时在前期研究中，我们发现辛温通阳中药葱白提取物治疗NAFLD大鼠后，肝细胞脂肪变性的减轻与PGC-1α的高表达相关, PGC-1α的活化可以调控肝细胞能量和线粒体代谢。.本课题运用体内实验和体外实验相结合的方法，以高脂饲料喂养法建立NAFLD大鼠模型，用脂肪乳剂培养诱导体外肝细胞脂肪变性，均以抗PGC-1α腺病毒小干扰RNA为对照，观察辛温通阳中药干预前后NAFLD线粒体呼吸链、肝糖异生及脂肪酸β氧化三条途径相关信号基因的表达。研究发现辛温通阳中药葱白提取物可以调节相关信号基因的表达水平，从而调节线粒体呼吸链及能量代谢。但葱白提取物发挥作用依赖辅激活因子PGC-1α的活化水平，转染了PGC-1α小干扰RNA的NAFLD大鼠及体外培养的细胞，尽管也给予了同样剂量的葱白治疗，由于PGC-1α的表达和活化受到抑制，其线粒体呼吸链、肝糖异生及脂肪酸β氧化关键基因的表达水平下降，治疗NAFLD的作用也受到影响，从而证实了辛温通阳中药葱白提取物是通过活化PGC-1α调控线粒体代谢发挥治疗NAFLD的可能分子途径。