含有细菌和病毒混合抗原的新型体内DC疫苗抗肿瘤作用研究

DC疫苗已经在肿瘤临床治疗中应用，但该治疗方法一般都需要在体外进行复杂的技术操作，成本高，技术标准化难。MIP-3α是DC 特异性趋化因子，本项目利用基因工程技术构建重组MIP-3α腺病毒并转染肿瘤细胞，然后将转染重组MIP-3α腺病毒的肿瘤细胞和灭活细菌共溶于海藻酸盐溶液中，制备成可以注射的微颗粒（50-300μM）。这种"海藻酸盐微颗粒"含有可以分泌MIP-3α的肿瘤活细胞、腺病毒和细菌抗原成份。肿瘤细胞分泌的MIP-3α可以趋化DC，腺病毒和细菌抗原成份既可以有效诱导传统的免疫反应又能创造一种肿瘤免疫反应的微环境。因此，这种"海藻酸盐微颗粒"有可能是一种简单而有效的体内DC疫苗模式。我们将建立数种小鼠肿瘤模型，用"海藻酸盐微颗粒"作为疫苗，了解是否具有抑制肿瘤生长和转移的作用，同时通过免疫学、分子生物学等生物医学技术证明这种"海藻酸盐微颗粒"的作用机理，寻找一种肿瘤生物治疗的新方法。

当前，用肿瘤细胞裂解物与自体DC细胞在体外混合刺激的DC疫苗、巨噬细胞炎症蛋白3α（MIP-3α）的表达载体注入肿瘤部位的体内DC疫苗、利用各种办法逆转肿瘤组织中的免疫抑制微环境等免疫生物治疗肿瘤的办法已经有文献报道。因此，将现有的多种肿瘤免疫生物治疗策略于一体从而放大单一治疗策略的不足便是一种新的技术方法。本项目利用基因工程技术构建MIP-3α重组腺病毒，并将重组MIP-3α腺病毒转染肿瘤细胞，然后将转染MIP-3α重组腺病毒的肿瘤细胞和灭活的细菌或其成分（本研究使用卡介苗）共包埋于海藻酸盐微颗粒中获得PaLtTcAdMIP3α的新颗粒。理化特性研究发现，PaLtTcAdMIP3α中含有转化了MIP-3α重组腺病毒的单一肿瘤细胞，体外检测发现PaLtTcAdMIP3α可以有效表达MIP3α基因和分泌MIP3α重组蛋白，并且在体外和注射的腹腔（体内）都发现具有明显的趋化DC的作用；此后将PaLtTcAdMIP3α作为疫苗，在四个小鼠肿瘤模型中注射于腹腔，发现PaLtTcAdMIP3α组小鼠肿瘤体积明显小于对照组，生存时间也明显长于对照组，用正常小鼠观察6个月没有发现PaLtTcAdMIP3α免疫小鼠具有明显的副作用，说明PaLtTcAdMIP3α作为疫苗具有明显的治疗肿瘤作用；进一步进行机理研究发现，PaLtTcAdMIP3α免疫可以有效诱导抗肿瘤特异的细胞免疫反应，脾脏中发现PaLtTcAdMIP3α免疫有更多分泌干扰素-γ的CD8和CD4淋巴细胞；用ELISA和Western Blot、ELISPOT等方法检测体液免疫也发现，PaLtTcAdMIP3α免疫也可以诱导肿瘤细胞抗原特异的抗体，主要抗体成分为IgG1和IgG2a；使用PaLtTcAdMIP3α免疫小鼠的淋巴细胞和抗体过继免疫治疗也发现其抑制肿瘤生长主要和细胞免疫相关，体液免疫起一定的作用，这种作用和CD4和CD8都有关联，但CD8起到更重要的作用；最后，我们对肿瘤微环境进行研究，结果发现，在PaLtTcAdMIP3α免疫的小鼠肿瘤组织中含有更多分泌干扰素-γ的CD8淋巴细胞，但调节T细胞（Treg）则明显减少，说明PaLtTcAdMIP3α免疫改善免疫抑制的微环境，促进了抗肿瘤免疫作用。这些结果表明，PaLtTcAdMIP3α是一种有效的多策略联合肿瘤免疫生物治疗新方法。