吗啡依赖条件下大鼠触液核的表观遗传学机制研究

吗啡依赖心瘾难治的原因在于机制不清、临床缺乏有效手段和药物。本实验室初步发现触液核（我们新发现的脑内新核团）与吗啡依赖有关，但其参与吗啡依赖的确切机制仍不清楚。表观遗传学新近被引入药物依赖领域，这对于探索药物依赖的非基因突变机制有重大意义。现采用条件位置偏爱测试建立大鼠吗啡依赖模型，CB-HRP侧脑室注射示踪触液核，表观遗传学研究方法（染色质免疫共沉淀-芯片技术、DNA甲基化特异性PCR）结合qRT-PCR、Western blot、免疫荧光、免疫电镜及药理学手段分析在吗啡依赖状态下大鼠触液核: ①与 Epigenetics机制相关的靶基因bdnf,nk1r甲基化、组蛋白乙酰化修饰和表达的变化，②外源性调控DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰对吗啡依赖行为和下游靶基因及蛋白表达的影响。期望揭示大鼠触液核参与吗啡依赖的部分 Epigenetics机制，为探索戒毒治疗新靶标、研发戒毒新药提供新思路。

本项目聚焦触液核（我们新发现的脑内新核团）参与吗啡依赖的表观遗传机制研究。.受本项目立项与依托单位的支持, 本实验室针对既往研究发现过程中的科学问题：触液核参与了吗啡成瘾但确切机制并不明确。以触液核为靶点，将表观遗传学引入疼痛、药物依赖的研究领域，有助于揭示药物成瘾的非基因突变机制。课题组成功建立大鼠吗啡躯体依赖与精神依赖模型（条件位置偏爱测试）的视频记录分析系统，并创新应用霍乱毒素亚单位B (toxin subunit B, CB)与皂草素(saporin, SAP) 交联复合物 (CB-SAP)靶向毁损触液神经元技术、特异性地毁损触液神经元系统，建立了触液神经元系统缺失的动物模型，系统考察了缺失触液神经元系统前/后机体对于病理性疼痛、药物依赖/戒断刺激的整体行为学变化。利用表观遗传学研究方法结合qRT-PCR、Western blot、免疫荧光、免疫电镜及药理学手段，我们分析了在吗啡依赖状态下大鼠触液核: ①与 Epigenetics机制相关的靶基因bdnf,nk1r基因与启动子区域甲基化、组蛋白乙酰化修饰和表达的变化；②外源性调控DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰对吗啡依赖行为和下游靶基因及蛋白表达的影响。该研究初步揭示了大鼠触液核参与吗啡依赖的细胞、分子机制；为探索戒毒治疗新靶标提供了理论与实验技术基础，并为更为深入地研究触液系统参与阿片类药物镇痛副作用奠定了可靠的实验技术方法学。.本项目已发表标注基金编号的学术论文9篇（SCI收录6篇）；本课题研究成果获江苏省科技进步一等奖1项、教育部自然科学奖二等奖1项；培养研究生10名(博士生4人, 2名已毕业；硕士生6人，5人已毕业）；培养省级学术带头人后备人选1人；衍生并培育国家自然科学基金青年基金2项（基金编号：81100813, 81200862, H0903）；受本项目脑-脑脊液调节理论与技术方法学的启发，项目负责人成功研发了“碳酸氢盐生理平衡液”，并获专利授权2项。