LYVE-1(+)Mac-1通过NF-κB途径调节宫颈癌淋巴管新生机制的研究

最近发现巨噬细胞中存在一类表达淋巴管内皮细胞标记分子LYVE-1 的CD11b+细胞(LYVE-1+Mac-1)可以调节淋巴管新生，申请者前期研究发现宫颈癌组织中也广泛存在此细胞。本课题旨在研究LYVE-1(+)Mac-1细胞通过NF-κB途径调节宫颈癌淋巴管新生机制。首先检测宫颈癌组织中LYVE-1+Mac-1密度和NF-κB表达水平，结合宫颈癌组织和患者血清中的淋巴管新生因子的情况分析其与宫颈癌相关淋巴管新生之间的关系；进一步从宫颈癌组织中分离培养LYVE-1(+)细胞，研究调节NF-κB途径对淋巴管内皮细胞增殖，迁移和成环能力的变化；在体水平研究调节巨噬细胞和NF-κB途径对淋巴管新生和宫颈癌转移的影响。通过课题的开展将对宫颈癌相关淋巴管新生的机制得到新的认识，为宫颈癌的防治策略提供新的思路。

近年来巨噬细胞被认为与淋巴管的生成密切相关。本课题的研究重点在于肿瘤相关巨噬细胞在宫颈癌的淋巴转移中的临床及功能意义。通过在宫颈样本中进行免疫组织化学染色(包括子宫颈癌浸润性鳞状上皮癌、宫颈上皮内肿瘤,和正常宫颈)，我们发现巨噬细胞在肿瘤间质中的增加与淋巴转移显著相关。巨噬细胞体外募集实验结果显示同空白对照组和正常宫颈上皮细胞CRL2614组相比，宫颈癌细胞系组巨噬细胞的迁移明显增加，表明宫颈癌细胞可以促使已存在的巨噬细胞的定向迁移。宫颈癌细胞的transwell侵袭和迁移实验结果显示，在巨噬细胞的影响下，相比空白对照组，宫颈癌细胞穿透基质胶和微孔运动到对侧的侵袭和迁移数目均明显增加。我们通过对人淋巴内皮细胞进行体外成管培养发现，与其他条件培养基相比（包括淋巴内皮细胞生长培养基，正常宫颈上皮生长上清条件培养基，单独的巨噬细胞和宫颈癌细胞生长上清条件培养基），淋巴内皮细胞在巨噬细胞与宫颈癌细胞直接共培养上清的条件培养基中形成更多的管状结构。对巨噬细胞和宫颈癌共培养上清进行ELISA检测发现，IL-1β和IL-8显著增加。进一步采用免疫磁珠分离技术分离巨噬细胞-宫颈癌细胞直接共培养模型中两种细胞，发现IL-1β和IL-8的mRNA表达在与巨噬细胞共培养的宫颈癌细胞中的表达增加,同时,VEGF-C和VEGF-A的mRNA表达在与宫颈癌细胞共培养的巨噬细胞中显著增加。本课题的研究结果表明肿瘤相关巨噬细胞通过与周围的宫颈癌细胞互动相互作用而促进淋巴管的生成及淋巴转移。