基于“痰浊瘀血”理论从TLR/NF-κB信号通路探讨当归芍药散抗阿尔茨海默病(AD)的作用机制

Alzheimer's disease (AD) is a degenerative disease of nervous system which serious harm to the health of the elderly. There is no drug to cure AD. Chinese interpretation of AD as "phlegm and blood stasis", Danggui Shaoyao San (DSS) can eliminate phlegm and turbid blood, which is effective in treating AD. The AD pathogenesis is not clear,the activation of microglia and the inflammatory response is thought to be an important factor leading to the AD. Previous study found that DSS Containing Serum has strong inhibitory effect on the activation of microglia, and significantly reduced microglia Toll like receptor (TLR) expression. It suggests that DSS has the effect of TLR to inhibit the activation of microglia may occur, reduce inflammation to delay AD. But the mechanism of DSS inhibition of microglia activation is not clear. Therefore, this project aims to microglia as target, using the method of immunohistochemistry, Western blotting, RT-PCR technology combined with the animal model, from the cell, molecule and gene level to explore the effect of DSS on the activation of TLR/NF-κB mediated inhibition of microglia, clear the site of action and target point, to further clarify the molecular mechanism of DSS in the treatment of AD, and to provide the theoretical basis for its clinical application.

阿尔茨海默病(AD) 是一种严重危害老年人健康的神经系统退行性疾病，临床尚无根治AD的特效药。中医对AD的诠释为“痰浊瘀血”，当归芍药散（DSS）有祛痰浊和化瘀血的特点，临床用其治疗AD疗效确切。而AD病机不明确，其中小胶质细胞的激活及其炎症反应被认为是导致AD的重要因素之一。前期研究发现当归芍药散含药血清对小胶质细胞的激活具有较强的抑制作用，并显著降低小胶质细胞Toll样受体（TLR）表达。提示DSS可能通过影响TLR来抑制小胶质细胞的激活，降低炎症反应来延缓AD的发生。但关于DSS抑制小胶质细胞激活的作用机制并不清楚。因此，本项目拟将小胶质细胞为靶细胞，采用免疫组化、Western blotting、RT-PCR等技术结合动物模型，从细胞、分子和基因水平上探讨DSS影响TLR/NF-κB通路介导的小胶质细胞激活机制，从细胞因子信号通路传导方面，为DSS在AD的临床应用提供新的理论依据。

项目的背景：阿尔茨海默病(AD)是一种严重危害老年人健康的神经系统退行性疾病，临床尚无根治AD的特效药。中医对AD的诠释为“痰浊瘀血”，当归芍药散（DSS）有祛痰浊和化瘀血的特点，临床用其治疗AD疗效确切。而AD病机不明确，其中小胶质细胞的激活及其炎症反应被认为是导致AD的重要因素之一。前期研究发现当归芍药散含药血清对小胶质细胞的激活具有较强的抑制作用，并显著降低小胶质细胞Toll样受体（TLR）表达。提示DSS可能通过影响TLR来抑制小胶质细胞的激活，降低炎症反应来延缓AD的发生。.研究内容：本项目拟将小胶质细胞为靶细胞，采用Westernblotting、免疫组化、RT-PCR等技术结合动物模型，从细胞、分子和基因水平上探讨DSS影响TLR/NF-κB通路介导的小胶质细胞激活机制，从细胞因子信号通路传导方面，为DSS在AD的临床应用提供新的理论依据。.重要结果：从细胞水平的研究发现当归芍药散（DSS）能抑制LPS和Aβ刺激的小胶质细胞的激活，实验结果显示给与DSS的细胞炎性因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS）的表达和对应的mRNA下降，明确当归芍药散抑制小胶质细胞激活的作用方式。并从TLR/NF-κB的信号通路上检测相关通路上的受体（TLR4，IκB，P-IκB，P65,P-P65）的表达，阐明当归芍药散经由TLR介导信号通路抑制小胶质细胞激活的分子机理。.从动物水平上对Aβ造模的老年痴呆小鼠和基因敲除的TLR4小鼠的观察小鼠的水迷宫，观察自主活动的行为学变化，并检测相关的炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS）的表达和相应的TLR/NF-κB的信号通路上的受体（TLR4，IκB，P-IκB，P65,P-P65）的作表达，同时通过染色和免疫组化进行组织形态学的观察，发现当归芍药散能降低Aβ造模的老年痴呆小鼠的神经炎症，改善行为学。对于基因敲除的TLR4小鼠，我们发现基因敲除后阻断TLR4改善了水迷宫行为学和下调了炎症因子和相关NF-κB信号通路中的蛋白表达。.使成为TLR靶向神经炎症奠定理论基础，同时也为揭示TLR在小胶质细胞激活相互关联中的调控作用提供科学依据。