斑马鱼mypt1突变体前肾发育缺陷的机制研究

许多肾脏疾病是肾脏发育调控基因突变所致，研究肾脏发育对于治疗肾脏疾病意义重大。斑马鱼前肾是哺乳动物后肾的对应物，是研究肾脏发育的理想模型。我们发现斑马鱼mypt1突变体中前肾进曲小管PCT分化正常而前段部分缺失。Mypt1调控中胚层细胞的迁移，突变体的表型很可能是由斑马鱼前肾祖细胞intermediate mesoderm（IM）迁移异常导致的。IM细胞迁移及其不同部位IM细胞在前肾中命运谱的研究未见报道。本课题运用细胞实时追踪这一斑马鱼模式生物的优势技术，设计以下实验研究Mypt1在斑马鱼前肾发育中的功能：1）建立IM细胞特异性启动子驱动的可变荧光蛋白转基因鱼，研究野生型和突变体IM细胞的迁移和不同部位IM细胞在前肾中的命运谱；2）分析mypt1突变体前肾发育缺陷；3）检测mypt1突变体表型的自主性；4）检测突变体前肾的细胞周期和细胞凋亡；5）基因芯片或深度测序技术找寻下游基因。

肾脏发育的研究有助于临床肾脏疾病的治疗。斑马鱼前肾与哺乳动物后肾功能相同而结构简单，是研究肾脏发育的理想模型。斑马鱼前肾发育自中胚层的intermediate mesoderm（IM），前期的研究结果表明斑马鱼Mypt1调控中胚层细胞的迁移，我们发现mypt1突变体中前肾进曲小管PCT前段部分缺失，推测可能是由于IM细胞迁移缺陷导致。本课题拟运用细胞实时追踪这一斑马鱼模式生物的优势技术，构建IM细胞特异性启动子驱动的可变荧光蛋白转基因鱼，研究不同部位IM细胞在前肾中的命运谱；构建前肾特异性启动子驱动的荧光蛋白转基因鱼，运用这两类转基因品系分析mypt1突变体前肾的发育缺陷，研究mypt1在斑马鱼前肾发育中的功能。本课题已完成构建前肾特异性启动子驱动的荧光蛋白转基因品系cdh17:egfp和enpep:egfp，IM细胞特异性启动子驱动的可变荧光蛋白转基因品系pax2a:dendra和lhx:dendra的构建已进展至founder筛选，我们将运用上述转基因品系建立IM命运谱和mypt1突变体前肾发育缺陷研究。