miR-142-3p在小鼠乳腺发育和泌乳中的调控作用及其机理

microRNA（miRNA）在组织器官发育中的重要作用日趋明朗，但目前miRNA在乳腺发育和泌乳中的调控作用及其机理知之甚少。本研究将采用全基因组芯片、qRT-PCR、免疫印迹、激光共聚焦显微等现代分子生物学技术，检测小鼠乳腺不同发育时期miR-142-3p的表达，揭示其在乳腺发育和泌乳过程中的变化及其规律；应用乳腺上皮细胞培养、miR-142-3p超表达和抑制实验，确定miR-142-3p对小鼠乳腺发育和泌乳过程的调控作用；构建荧光素酶表达载体，结合生物信息学技术，阐明miR-142-3p作用于乳腺发育和泌乳过程的靶基因及其调控机理；观测miR-142-3p调控乳腺发育和泌乳过程的生物学效应，为生物调控乳腺发育和泌乳提供新的思路。

本项目以小鼠为动物模型，研究miR-142-3p在小鼠乳腺发育和泌乳中的作用及其机理。应用生物信息学技术，预测了miR-142-3p在乳腺发育泌乳过程中调控的靶基因网络；构建了荧光素酶报告基因载体验证了miR-142-3p调控催乳素受体3’UTR位点；通过体外实验及体内实验，验证了miR-142-3p影响PRLR等乳腺发育和泌乳相关基因的表达；脂质体转染法向细胞中转染miR-142-3p mimics/inhibitor，应用CASY细胞活力分析仪检测活细胞数和细胞活力的变化；同时，应用HPLC检测酪蛋白和乳糖分泌的变化，采用TG试剂盒检测细胞甘油三酯的分泌情况。实验结果表明：miR-142-3p的靶基因为PRLR，其调控靶基因种子序列为ACACUAC； miR-142-3p在小鼠乳腺发育、泌乳及退化过程中表达量不同，具有明显的时序性，通过维持和调节PRLR在小鼠乳腺中的表达，在乳腺发育和泌乳过程中发挥重要作用。