肿瘤相关内皮细胞不完全热消融后功能改变及其对肝细胞癌侵袭转移的影响

残留癌及其快速进展是影响肝细胞癌（HCC）射频消融（RFA）疗效的重要因素。本课题组前期研究提示，低温不完全热消融是残留癌快速进展的重要原因，肿瘤微环境改变和血管生成增多是其重要环节。鉴于肿瘤相关内皮细胞（TAECs）是肿瘤微环境的主要决定因素和肿瘤血管生成的重要基础，课题组提出：低温不完全热消融可影响TAECs结构和功能，增强其成管能力，导致血管生成增多，进而促进HCC细胞的增殖、侵袭和转移。为证实假设，本课题拟应用免疫磁珠从手术切除的HCC组织标本中分离、培养TAECs，体外观察TAECs对不完全热消融的耐受情况，检测不完全热消融后TAECs成管能力和迁移能力的变化，以及相关信号通路的改变，离体和在体检测TAECs对HCC细胞侵袭及转移能力的影响。该假设如获证实，将在细胞和分子层面，进一步揭示HCC RFA后残留癌快速进展的机制，为提高其临床防治水平提供新的思路。

残留癌快速进展是影响肝细胞癌（HCC）射频消融（RFA）疗效的重要原因。本课题组前期研究发现，低温不完全热消融是残留癌快速进展的重要原因，肿瘤微环境改变和血管生成增多是其重要环节。肿瘤相关内皮细胞（TAECs）是肿瘤微环境的主要决定因素，可能参与了残留癌的快速进展。.本课题提出低温不完全热消融可影响TAECs结构和功能，增强其成管能力，进而促进HCC细胞的增殖、侵袭和转移能力。为证实假设，本课题应用免疫磁珠从手术切除的HCC新鲜组织标本中分离、培养TAECs，体外模拟不完全热消融（水浴42℃和47℃），观察不完全热消融后TAECs的形态学改变以及TAECs增殖、迁移和成管能力的变化。我们还检测了不完全热消融后TAECs与HCC细胞株HepG2-GFP和HCCLM3-GFP的相互作用。具体实验包括：应用CD31、vWF、VEGFR1和VEGFR2 等体外鉴定TAECs；通过CCK-8试剂盒、迁移试剂盒等检测TAECs的增殖、迁移和成管能力；应用细胞ELISA法检测TAECs细胞E-selectin、ICAM-1 和 VCAM-1的表达；通过侵袭试剂盒分析TAECs对HepG2-GFP和HCCLM3-GFP侵袭的影响；应用ELISA法检测TAECs培养基中IL-6、IL-8、MCP-1 和GRO-α 的表达；检测不完全热消融24小时后TAECs侵袭和转移相关信号通路Akt、ERK1/2、STAT3和 NF-κB等。结果发现，不完全热消融后TAECs的增殖、迁移和成管能力明显增强；TAECs能通过上调E-selectin、ICAM-1 和 VCAM-1，增加HepG2-GFP和HCCLM3-GFP的粘附；TAECs能通过上调IL-6、IL-8、MCP-1 和GRO-α，促进HepG2-GFP和HCCLM3-GFP的侵袭；不完全热消融能增强Akt、ERK1/2和 NF-κB信号通路，而抑制STAT3通路。上述结果发表于Journal of Translational Medicine 2012, 10:230。.为进一步探讨不完全热消融后HCC快速进展的机制，我们应用基因芯片分析了不完全热消融后TAECs的全基因谱表达情况。结果发现，不完全热消融后，TAECs的Calpain8（钙调节蛋白酶8）表达明显增加，提示TAECs迁移和成管能力的增强可能与Calpain8有关。