补脏通络方调控NO对糖尿病大鼠主动脉内皮细胞合成MMPS/TIMPs影响的研究

Experimental results show that buzangtongluofang protecting diabetic large vascular relates to NOS/NO levels. Study confirmed that the deposition of extracellular in diabetic macrovascular disease relates to MMPs imbalances and NO could regulate MMPs /TIMPS expression. We plan to use the diabetic rats with macrovascular lesion model and SVAREC cells as research objects, observe the interventive effect of buzangtongluofang on NO content、NOSactivity and MMPs /TIMPS expression in aortic endothelial cells of diabetic rats and SVAREC cells culture .In order to observe the effects of Buzangtongluofang control NO to take effect on synthetizing MMPs/TIMPs in vascular endothelial cells of diabetic rats and the role of NO-MMPs/TIMPs pathway in diabetic macroangiopathy,provide the experimental basis of Buzangtongluofang intervening diabetic large vascular disease.

前期实验表明补脏通络方逆转糖尿病大血管内膜增厚改变与提高一氧化氮合酶（NOS）、一氧化氮（NO）水平有关。研究显示糖尿病大血管病变早期细胞外基质沉积与基质金属蛋白酶（MMPs）/金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)表达失衡有关，且NO可能调控MMPs/TIMPs表达。本课题拟采用糖尿病合并大血管病变大鼠模型和大鼠主动脉内皮细胞株为研究对象，观察补脏通络方对糖尿病大鼠主动脉内皮细胞和高糖环境下大鼠主动脉内皮细胞培养NO、NOS活性及MMPs2、9/TIMPs1、2表达的影响，以探讨补脏通络方调控NO对糖尿病大血管内皮细胞合成MMPs/TIMPS的影响及其该方逆转糖尿病大血管内膜增厚的可能机制，同时探讨NO-MMPs/TIMPs传导通路在糖尿病大血管内皮损伤中的作用，为临床进一步推广应用补脏通络方提供实验依据，为糖尿病大血管病变的防治提供新理论新方法。

我们在多年临床基础上创制补脏通络方，前期实验表明，补脏通络方除能显著改善糖尿病血糖、血脂紊乱外，还能有效预防和延缓糖尿病血管病变的发生；补脏通络方逆转主动脉内膜增厚改变的机制可能与其改善内皮细胞分泌功能有关，然而其具体作用机制尚不清楚。本研究拟观察补脏通络方对糖尿病大血管内皮细胞NO、eNOS及MMP-9/TIMP-1平衡的影响，以及补脏通络方对糖尿病肾组织的作用和MMP-9/TIMP-1平衡的影响，深入探讨其预防和延缓糖尿病血管病变的可能机制。研究结果：补脏通络方能明显逆转糖尿病主动脉内膜增厚改变，改善糖尿病肾小球毛细血管基底膜增厚等病理改变，保护糖尿病肾功能；降低肾重指数（P<0.01），降低主动脉内膜及肾组织Ⅳ型胶原表达水平（P<0.01）；下调肾组织TGF-β表达（P<0.01）；降低血清ET水平及ET/NO比值（P<0.01），升高NO及eNOS表达水平（P<0.01）；降低主动脉内膜MMP-9/TIMP-1比值（P<0.01），升高肾组织MMP-9/TIMP-1比值（P<0.01），调节主动脉内膜及肾组织MMP-9/TIMP-1比值趋于正常水平。结论：1补脏通络方对糖尿病大血管内皮细胞具有保护作用。其机制可能与补脏通络方改善糖尿病糖代谢紊乱，减少血管内皮细胞Ⅳ型胶原表达以及改善血管内皮的分泌功能，降低ET/NO比值有关；改善内皮细胞NO分泌，调节内皮细胞MMP-9/TIMP-1平衡以稳定血管基质的正常代谢，可能是补脏通络方保护糖尿病大血管内皮的具体机制之一。2补脏通络方对糖尿病早期肾脏损害具有保护作用。下调肾组织TGF-β表达，调节MMP-9/TIMP-1平衡，促进胶原降解，可能是补脏通络方保护糖尿病肾脏作用的机制之一。血管并发症是糖尿病的主要并发症和致死原因，目前西药治疗糖尿病血管并发症有一定局限性，且存在诸多不良反应，中药在预防、延缓或逆转糖尿病血管病变上具有多层次、多靶点综合调节等优势。本研究结果为临床进一步推广应用补脏通络方提供实验依据，为糖尿病大血管病变的防治提供新理论新方法。目前我校与武汉市蔡甸区中医院合作申报武汉市卫生局产学研项目《补脏通络方对糖尿病肾组织保护作用研究》成功，正在进行补脏通络方临床观察相关研究。