联合初治、放疗后残留/复发鼻咽癌活组织及细胞系筛查鼻咽癌放射抗拒基因

鼻咽癌存在放射敏感异质性，初次放疗效果迥异，而初次放疗后残留/复发的鼻咽癌，再程放疗效果更差，原因尚未完全明确。本研究以初治、初次放疗后残留/复发的新鲜离体鼻咽癌组织（经病理证实）为研究对象，用基因芯片检测其基因表达差异；同时体外模拟临床常规分割放疗方式70Gy照射鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、CNE3，获得照射后的存活细胞 CNE1R70、CNE2R70、CNE3R70，建立临床放疗前后成对鼻咽癌细胞模型，并以模型作为研究工具，联合残留/复发鼻咽癌活组织和细胞模型，用基因芯片筛查导致鼻咽癌放射抗拒的关键基因，用荧光实时定量PCR验证部分关键基因，进一步利用细胞模型和RNA干扰、构建质粒或转基因病毒、细胞转染、集落形成法、动物试验、基因功能验证等方法，系统研究经基因芯片筛选出的关键基因与鼻咽癌放射抗拒性之间的关系，探索导致鼻咽癌放射抗拒及放疗后残留/复发的关键基因及分子机制。

鼻咽癌存在放射敏感异质性，初次放疗效果迥异，初治后残留/复发的鼻咽癌，再程放疗效果更差，原因尚未明。本研究通过体外实验模拟鼻咽癌临床常规分割放疗70Gy （6Mv X线，70Gy/35f，2Gy/天，1次/日，5次/周）照射鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、CNE3，获得照射后细胞CNE1R70、CNE2R70、CNE3R70，成功建立了临床放疗前后成对的鼻咽癌细胞模型。研究3对鼻咽癌细胞的生物学特性均发现，CNE1R70、CNE2R70、CNE3R70细胞较亲代细胞生长速度均减缓，细胞贴壁后进入指数生长期的潜伏期明显延长，倍增时间延长，并在裸鼠试验中得到证实。通过平板集落形成法检测其放射敏感性后初步统计发现，CNE1R70、CNE2R70、CNE3R70细胞较亲代细胞均表现出不同程度的放射抗拒性。通过Affymetrix公司CytoScan HD的RNA芯片初步检测比较发现，CNE1 VS CNE1R70重复样本RNA芯片3次检测结果显示，上调表达的基因有19条，都下调表达的基因有1172条，CNE2 VS CNE2R70上调表达的基因有295条，下调表达的基因有912条，而CNE3 VS CNE3 R70上调表达的基因有71条，下调表达的基因有610条。组间比较结果显示，3对细胞组共同上调表达的基因仅有1条，均下调表达的基因有104条。对表达异常的基因进行功能分析发现，差异表达的基因的基因有经典的DNA损伤修复相关基因，还有信号通路、细胞结构、免疫、代谢、活性酶和其他功能基因。这些基因改变和功能变化与鼻咽癌放射敏感异质性仍有待进一步研究和探索。