内分泌干扰物质影响鱼类性别分化的敏感基因及其功能研究

本研究以环境雌激素类物质影响性别分化发育的分子机理研究为主要目标，选用青鳉鱼作为试验动物，运用先进的分子生物学技术，围绕性别分化发育相关基因，特别对本研究小组发现的一些新基因，系统研究环境雌激素类物质暴露下雌雄同体形成过程中基因表达水平变化和基因功能，探索这些基因的雌雄同体形成的级联调控模式。通过本项目，可以进一步加深对雌雄同体发生机理和内分泌干扰物质作用途径的理解，为建立环境雌激素干扰性别分化的早期诊断手段，开发可用于指示环境雌激素诱导下雌雄同体发生的分子生物标记物等应用研究奠定相关的理论基础。

本项目紧密围绕内分泌干扰物质影响鱼类性别分化的敏感基因及其功能这个核心问题，完成了项目内容，实现了预期目标，并取得了如下主要成果：1. 建立环境雌激素物质暴露情况下，青鳉鱼不同发育时期（孵化时期、性别分化期前期、性别分化时期、性腺发育时期）的基因表达谱；2. 确定了环境雌激素影响青鳉鱼性别分化发育过程的敏感时期为雄鱼性别分化时期，约为孵化后14-21天。并筛选出环境雌激素暴露条件下可以用来指示影响性别分化发育过程（即雌性化过程）的敏感基因，主要包括OSPs和ZP 类蛋白等；3. 建立了用于指示雌雄同体发生的效应分子标记物：OSP1。首次克隆了OSP1基因802bp基因全序列，分析了基因序列特征及组织学细胞学表达特征，并深入解析了其基本功能；4. 首次克隆OSP1上游2067bp启动子区，构建了稳定的pMOSP1-EGFP转基因青鳉鱼品系用于雌雄同体效应研究；5. 在pMOSP1-EGFP转基因鱼的基础上建立起了雌雄同体发生短期检测方法，并用于开展相应的物质筛选研究。