多囊卵巢综合征肝郁痰阻特征及其分子生物学机制研究

Our previous studies have shown, liver stagnation with phlegm is an important pathogenesis in polycystic ovary syndrome (PCOS). This study uses DHT to make PCOS in rats, then they were respectively given Chaihushugansan ,Erchentang, Chaihushugansan plus Erchentang for intervention,then (1) endocrine indexes such as FSH, LH, INS, etc, will be detected, to explore the endocrine and metabolic change after treatment of soothing liver and resolve phlegm ,then to discover the endocrine and metabolic manifestation of liver depression and phlegm. (2) the expression levels of hypothalamic gonadotropin-releasing hormone, gonadotropin-releasing hormone receptor, androgen receptor in relevant parts of the hypothalamus, as well as expression levels of gonadotropin-releasing hormone receptor in rat pituitary will be detected, to analyze the influence in the function hypothalamic - pituitary - ovarian axis with treatment of soothing liver and resolve phlegm, then to research the link between liver stagnation and phlegm in such system. (3) mRNA expression levels of IRS1 and IRS2 and its tyrosine phosphorylation levels in ovarian and other tissues will be detected,to analyze the influence of treatment of soothing liver and resolve phlegm in insulin resistance, then to discuss the link between liver stagnation and phlegm in such process. By the above steps, the pathological characteristics and molecular biological mechanisms of PCOS will be researched, in order to provide some objective basis for the syndrome differentiation of PCOS, and provide some ideas for its treatment and efficacy evaluation.

课题组前期研究表明，肝郁痰阻是多囊卵巢综合征（PCOS）的重要病理特点。本课题采用双氢睾酮造PCOS模型大鼠，分别予柴胡疏肝散、二陈汤、二陈汤加柴胡疏肝散干预，（1）检测大鼠的FSH、LH、INS等内分泌指标变化，探讨疏肝化痰对内分泌代谢的影响，研究PCOS肝郁痰阻的内分泌代谢特点；（2）检测大鼠下丘脑相关部位的促性腺激素释放激素、促性腺激素释放激素受体、雄激素受体的表达水平，以及大鼠垂体促性腺激素释放激素受体表达水平，分析疏肝化痰对PCOS下丘脑-垂体-卵巢轴的功能影响，挖掘肝郁痰阻在下丘脑-垂体-卵巢轴的作用环节；（3）检测卵巢等组织IRS1、IRS2的mRNA表达水平及其酪氨酸磷酸化水平变化，分析疏肝化痰对胰岛素抵抗的影响，探讨肝郁痰阻在胰岛素抵抗中的作用环节。以此探讨PCOS的肝郁痰阻特征及其分子生物学机制，以期为PCOS的辨证提供一定的客观依据，并为其治疗和疗效评价提供一些思路。

目的：观察疏肝化痰法治疗多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠的内分泌学特征、下丘脑-垂体-卵巢轴功能、胰岛素抵抗等指标的影响，进一步挖掘PCOS肝郁痰阻的分子生物学机制，为疏肝化痰法治疗PCOS提供实验依据。.方法：采用来曲唑灌胃诱导PCOS模型大鼠，并分别使用二陈汤、柴胡疏肝散、二陈汤加柴胡疏肝散对PCOS模型大鼠进行干预。采用酶联免疫吸附法(ELISA)，检测血清中FSH、LH、PRL、E2、T、INS的含量。苏木素-伊红(HE)染色并观察大鼠卵巢组织形态学。Q-PCR和Western Blot法检测大鼠卵巢、肝脏、脂肪、骨骼肌组织的IRS-1、IRS-2的mRNA及蛋白表达水平。免疫组化法检测大鼠下丘脑AR、GnRH、GnRH-R和垂体GnRH-R表达水平。.结果：.1.性激素水平和卵巢形态学：与空白对照组比较，模型组T、FSH水平明显升高（P<0.05），LH水平明显下降（P<0.05），而E2、PRL、INS水平无明显变化，模型组镜下可见卵泡呈囊状性扩张，中无卵母细胞，颗粒层减少至1～3层，排列稀疏，少见不同发育阶段的卵泡及黄体。使用疏肝化痰法治疗后，T、FSH、LH激素水平均有所改善，各组卵巢组织镜下可见囊状卵泡数量减少，黄体增多，可见各级卵泡。.2.mRNA及蛋白变化情况：与空白对照组比较，模型组大鼠的卵巢、肝脏、脂肪、骨骼肌组织的IRS-1和IRS-2 mRNA及蛋白表达明显下降，运用疏肝化痰法治疗后，以二陈汤组上调最为显著（P<0.05），而柴胡疏肝散组无明显变化。.3.免疫组化结果：与空白对照组比较，模型组大鼠下丘脑GnRH、GnRH-R水平明显升高（P<0.05），AR水平有升高趋势，而垂体GnRH-R水平则无明显变化。运用疏肝化痰法治疗后，柴胡疏肝散组能够明显改善大鼠下丘脑AR、GnRH、GnRH-R水平（P<0.05），而其余各治疗组则无明显变化。.结论：PCOS存在着肝郁痰阻的病理基础，IRS-1、IRS-2 mRNA及蛋白表达水平变化导致的胰岛素抵抗可能是PCOS痰证的分子生物学基础之一，下丘脑AR、GnRH、GnRH-R水平变化导致下丘脑-垂体-卵巢轴功能下降可能是PCOS肝郁证的分子生物学基础之一。