MiR-17-92在胃癌干细胞自我更新中的作用及机制研究

肿瘤干细胞自我更新的调控机制尚未完全阐明。我们前期发现，miR-17-92基因簇在胃癌干细胞分化过程中表达逐渐下降。文献回顾显示， c-Myc和shh能上调miR-17-92表达，PTEN、p21、p57 是miR-17-92的潜在靶基因，而上述5分子均与干细胞自我更新有关。我们推测，c-Myc/Shh－miR-17-92－PTEN/p21/p57通路参与了胃癌干细胞自我更新调控。本项目拟首先明确上述6分子在胃癌干细胞分化过程中的表达变化规律。其次利用基因转染分别调变上述6分子在胃癌细胞的表达，通过tumorsphere实验、裸鼠体内成瘤、增殖、分化标志检测等阐明上述分子对胃癌干细胞自我更新能力的调控作用，并借助报告基因实验明确其上下游关系。最后检测上述6分子在胃癌组织的表达及其与患者临床病理资料、预后的相关性。为明确miR-17-92对胃癌干细胞自我更新的调控作用及机制提供理论依据。

本项目前期研究和文献提示，c-Myc/Shh－miR-17-92－PTEN/p21/p57 通路可能参与了胃癌干细胞自我更新调控。本项目研究目的是阐明miR-17-92在胃癌干细胞自我更新中的作用及其分子机制。.本项目内容分为三部分。第一，验证miR-17-92在胃癌干细胞中的分化相关表达变化。通过CD44+EpCAM+流式分选或无血清低粘附培养基肿瘤细胞球分离两种方式富集胃癌干细胞，之后将其置于正常培养条件下诱导分化。RT-PCR检测证实，miR-17、miR-19b、miR-20a、miR-92a表达水平呈逐渐下降趋势，与胃癌干细胞的分化密切相关；而miR-18a和miR-19a在胃癌干细胞中呈低水平表达，与干细胞分化无明显相关性。第二，探讨miR-17-92在胃癌细胞干性维持中的作用。借助基因转染、表型检测、靶分子预测、报告基因、挽救实验等发现，miR-17-92可通过靶向E2F1和HIPK1促进胃癌干细胞自我更新，miR-19a/b通过靶向MXD1促进胃癌细胞转移，miR-19a/b通过靶向PTEN和MECP2促进胃癌细胞耐药，miR-17通过靶向SOCS6促进胃癌细胞增殖，miR-92a通过靶向FOXD1促进胃上皮细胞肠化生。此外，本研究还发现，miR-129-5p通过靶向ABCB1、ABCC5和ABCG1调节胃癌细胞的化疗药物敏感性，miR-296-5p通过靶向抑制CDX1而促进胃癌细胞的增殖。第三，明确miR-17-92及其相关分子（p21、PTEN、p57、Myc）在胃癌患者中表达及其临床意义。本项目发现，胃癌组织miR-19a和miR-92a表达水平可作为胃癌患者的独立预后指标。胃癌患者外周血miR-17-92各个成员的表达水平均显著高于健康对照者，其对胃癌的诊断效能优于传统的胃癌标志物CEA和CA19-9。胃癌组织p21和PTEN水平均与胃癌患者预后呈正相关，而p57和Myc与患者预后无明显相关性，联合检测p57或PTEN和p21具有协同判定预后的价值。.课题组共发表直接相关SCI论著6篇、SCI特邀综述2篇、中文论著2篇。培养博士研究生1名、硕士研究生3名。课题负责人2015年入选国家创新人才推进计划中青年科技创新领军人才，项目组吴琼获得2015年度陕西省优秀博士学位论文。