丹参素通过雌激素受体调控TWEAK/Fn14/NF-κB信号通路在狼疮肾炎中的分子机制研究

Lupus nephritis is the main complication and cause of death in systemic lupus erythematosus, and there is a lack of ideal therapeutic drugs in the clinic. Studies have shown that estrogen can up-regulate the expression of TWEAK by ERα and aggravate renal damage in lupus nephritis.Our previous study found that Danshensu can competitively antagonize the binding of estrogen to ERα, inhibit the activation of NF-κB, and thus play a role in the treatment of renal injury in MRL/lpr lupus mice. Combining the latest research progress and our work basis, this project proposes the scientific hypothesis as follows: Danshensu inhibits TWEAK/Fn14/NF-κB signaling pathway by affecting ERα and plays a role in the treatment of lupus nephritis.This study will use the MRL/lpr susceptible lupus mouse model and pristane-induced non-spontaneous lupus mouse model to demonstrate the therapeutic effect of Danshensu on lupus nephritis; In order to confirm the estrogen receptor antagonism and regulation of Danshensu by the experiments of mock molecular docking, molecular binding experiments and protein molecular interaction; ERα-siRNA, TWEAK-siRNA transfection and other techniques were used to study the effect of Danshensu on TWEAK/Fn14/NF-κB signaling pathway. Therefore, it provides a theoretical basis for the development of new drugs for the treatment of lupus nephritis.

狼疮肾炎是系统性红斑狼疮的主要合并症和死亡原因，临床上缺乏理想的治疗药物。已有研究证明，雌激素可通过ERα上调TWEAK的表达，进而加重狼疮肾炎的肾损伤。我们前期研究发现丹参素可竞争性地拮抗雌激素与ERα的结合，抑制NF-κB的活化，从而减轻MRL/lpr狼疮小鼠的肾损伤。结合最新研究进展及我们的工作基础，本课题提出科学假说如下：丹参素通过影响ERα，抑制TWEAK/Fn14/NF-κB信号通路，发挥抗狼疮肾炎的作用。本课题采用MRL/lpr易感狼疮小鼠以及降植烷诱导的非自发狼疮小鼠模型，证实丹参素对狼疮肾炎肾损伤的作用；通过模拟分子对接、分子结合实验、蛋白质分子互作等实验明确丹参素的雌激素受体拮抗和调控作用；采用ERα-siRNA、TWEAK-siRNA转染等技术研究丹参素对TWEAK/Fn14/NF-κB信号通路的影响，为研发治疗狼疮肾炎的新型药物提供理论依据。

研究背景: 狼疮肾炎（Lupus Nephtitis，LN）是系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）最常见且严重的脏器损伤，是系统性红斑狼疮的主要合并症和死亡原因。目前临床上狼疮肾炎的治疗主要依靠大剂量糖皮质激素联合免疫抑制剂及细胞毒药物等，会产生一系列不良反应。 因此，亟需寻找疗效显著且安全性高的新靶点药物。主要研究内容:采用MRL/lpr和Pristane诱导 BALB/c狼疮小鼠模型，通过检测尿蛋白、尿素氮、血肌酐、抗ds-DNA、ANA等指标，观察肾脏组织病理变化、免疫复合物沉积，研究丹参素对狼疮肾炎的治疗作用。流式细胞术分析丹参素狼疮小鼠T细胞分型的影响，ELISA检测细胞因子的变化，Western blot观察TWEAK/Fn14/NF-κB信号通路表达情况，采用AIgG刺激系膜细胞建立体外增殖模型，研究丹参素通过雌激素受体调控TWEAK/Fn14/NF-κB信号通路对系膜细胞增殖的影响。重要结果: 丹参素能够显著降低MRL/lpr小鼠和Pristane诱导 BALB/c狼疮小鼠的尿蛋白、血尿素氮以及血肌酐水平，改善小鼠肾功能。降低血清中自身抗体（抗dsDNA及ANA）水平，减轻肾脏病理损伤和免疫复合物沉积，对狼疮肾炎造成的肾损伤有一定的保护作用。同时研究发现，丹参素能改善Th17/Treg比例失调，减少炎症因子的分泌，通过雌激素受体，降低TWEAK和Fn14表达抑制NF-κB信号通路激活，抑制系膜细胞增殖。科学意义: 证实了丹参素的抗狼疮肾炎作用，从雌激素受体入手，阐明丹参素通过雌激素受体调控 TWEAK/Fn14/NF-κB 信号通路的机制，为临床狼疮肾炎的治疗提供了新的思路和靶点。