应用SCAR标记技术对苦丁茶冬青炭疽病抗性进行早期鉴定

本申请项目拟采用RAPD-SCAR和AFLP-SCAR分子标记技术对苦丁茶冬青的炭疽病抗性进行早期鉴定。即首先采用RAPD技术和AFLP技术分别获得与抗炭疽病基因紧密连锁的特异性分子标记（特异性片段），然后将这些特异性片段分别进行回收、克隆和测序，并进行测序,并根据结果设计出特异的SCAR引物；再分别用这些特异性SCAR引物进行PCR扩增，以获得相应的SCAR分子标记。这种特异的SCAR分子标记所检测的是单一型带，操作简单，稳定性、稳定性和可重复性高，试验成本低廉，适合在生产上对大批量检测样品进行炭疽病抗性的早期鉴定。应用于苦丁茶冬青的育种工作时，可以及早确定其炭疽病抗性之强弱，以便尽早地淘汰与育种目标不符的育种材料，从而大大加快育种进程。

苦丁茶冬青（Ilex kudingcha C. J. Tseng）是我国民间的一种重要茶药两用植物，同时又是良好的园林观赏树种。苦丁茶炭疽病是为害苦丁茶冬青植株的最主要病害，它不仅严重地影响到苦丁茶产品的产量和品质，而且严重影响树体的观赏价值。由于苦丁茶冬青是一种多年生大型乔木，故其育种周期特长。本项目利用RAPD-SCAR和AFLP-SCAR两种双重分子标记技术对苦丁茶冬青种质材料的炭疽病抗性进行早期鉴定。在RAPD-SCAR标记方面，已成功开发出两对SCAR引物(S227-2073-23A// S227-2073-23B和S227-2073-27A// S227-2073-26B)，二者均能将相应的RAPD特异性标记成功地转化为SCAR标记，其准确率达到96.47%。在AFLP-SCAR标记方面，已成功地开发出一对AFLP-SCAR引物（F9//R9），利用该引物对对101份苦丁茶冬青种质材料的炭疽病抗性进行了批量检测，准确率高达97% 。本研究项目中新开发出的RAPD-SCAR和AFLP-SCAR标记对于加速苦丁茶冬青的育种进程有重意义。