分子伴侣CRT、CNX对创伤后应激障碍-PTSD杏仁核神经元的Ca信号通路及内质网径路细胞凋亡调控的分子机制

The mechanism of post-traumatic stress disorder (PTSD) is not fully understood until now.Previous studies showed apoptosis and dysfunction of Ca2+ homeostasis in the amygdala of PTSD rats,so we speculate that dysfunction of Ca2+ signal passway induced endoplasmic reticulum stress then triggered apoptosis,which may play important roles in the pathogenesis of abnormal memory in PTSD rats.Calreticulin (CRT) and Calnexin (CNX) were important molecular chaperones of endoplasmic reticulum stress and may play a key role in apoptosis via endoplasmic reticulum. The models of PTSD were created by SPS in this study. The expression of CNX and CRT were examined by immunofluorescence, western blot, CLSM, TEM and RT-PCR. The purpose of this study was to clarify the mechanisms of enhanced anxiety in PTSD by investigating the changes of CNX and CRT, which may provide a novel insight into better therapy and lower morbidity of PTSD.

创伤后应激障碍（post-traumatic stress disorder，PTSD）发病机制至今尚未清楚。研究发现PTSD杏仁核神经元发生细胞凋亡，钙稳态失调，这引发我们推测Ca信号通路调控障碍是内质网应激，最终导致内质网径路细胞凋亡，可能是PTSD记忆异常的重要发病机制。钙网膜蛋白（calreticulin，CRT)、钙联结蛋白（calnexin，CNX)是参与内质网应激的重要分子伴侣，在内质网应激径路凋亡中可能有重要作用。因此，本项目利用仿真PTSD-SPS模型，采用免疫组化、Western blot、Real-Time PCR、免疫电镜及免疫双标等技术检测内质网分子伴侣CRT、CNX的变化，旨在探讨CRT、CNX对PTSD杏仁核神经元内质网径路细胞凋亡及钙信号通路调控的分子机制，为进一步揭示PTSD恐惧增强的发病分子机制；提供实验依据，为临床有效治疗PTSD、降低发病率提供新思路

创伤后应激障碍（post-traumatic stress disorder，PTSD）是一种创伤后心理失衡状态，严重影响患者的健康和生活。近年来，PTSD发病率呈上升趋势，但发病机制至今尚未清楚, 更缺乏有效的临床治疗手段,其研究倍受国内外学者注目。PTSD的重要临床表现之一是恐惧记忆增强,杏仁核主司恐惧,故研究杏仁核PTSD恐惧记忆增强的发病机理是关键。前期研究发现PTSD杏仁核神经元出现钙超载，钙信号通路调控紊乱。钙超载可导致内质网应激，因此我们推测Ca信号通路调控障碍导致和钙调节功能相关的内质网的钙网蛋白（Calreticulin，CRT）和钙联蛋白（Calnexin，CNX)以及ERp57的调节异常，引起内质网过度应激出现未折叠蛋白反应并最终导致内质网径路细胞凋亡，可能是PTSD恐惧记忆异常的重要发病机制。本研究利用仿真PTSD-SPS模型，采用免疫荧光、Western blot、Real-Time PCR、免疫电镜等技术检测了PTSD杏仁核内质网分子伴侣CRT、CNX及ERp57的变化，探讨了CRT、CNX及ERp57对PTSD杏仁核神经元内质网径路细胞凋亡及钙稳态调控的分子机制，为进一步揭示杏仁核PTSD恐惧增强的发病分子机制提供了实验依据。研究结果:1.通过行为学检测了大鼠SPS刺激后空间记忆能力下降、记忆受损，探索能力下降，恐惧记忆增强；2. PTSD杏仁核内质网分子伴侣CRT、CNX及ERp57与表达明显上调；3.钙信号途径：钙超载致CaN、CREB过表达，钙稳态失控；4.内质网凋亡因子Caspase12表达明显上调,实验结果阐明了CRT、CNX及ERp57经未折叠蛋白反应，特异性激活Caspase-12,促进杏仁核神经元的细胞凋亡。至今为止，从杏仁核内质网凋亡径路研究PTSD的发病机制尚未见报道，本研究从分子水平阐明分子伴侣CRT、CNX及ERp57在PTSD杏仁核神经元内质网径路凋亡的调控作用，为从内质网调控钙稳态的分子伴侣出发找出干预PTSD恐惧记忆异常提出了治疗新思路，同时CRT、CNX及ERp57也有望成为有效冶疗PTSD疾病的药物开发的新靶点。该研究已正式发表相关论文4篇，其中SCI收录2篇，国家核心期刊2篇，尚有部分结果在投稿审理中。