lncRNAs在牙周炎中的作用及机制

近年来研究发现大量长片段非编码RNA（long non-coding RNAs，lncRNAs）被转录，且具有重要生物学功能。2011年有学者在研究心血管疾病和牙周炎关系中发现：在牙周炎组织细胞中有lncRNA CDKN2BAS的表达，但未进一步深入研究其对牙周炎的作用机制；同时本研究组在生物信息学分析中发现lncRNAs参与炎症及免疫应答过程，宿主的免疫应答在牙周炎中起着非常重要的作用，因而我们推测：lncRNAs 参与牙周炎的发生发展过程。本课题拟检测慢性牙周炎和侵袭性牙周炎牙龈的lncRNAs，以健康牙龈做对照，比较其内源性lncRNAs的变化，筛选炎性牙龈中重要lncRNAs，并利用体外细胞实验检测牙龈成纤维细胞在P.g LPS刺激下这些lncRNAs的变化，同时使用lncRNAs抑制剂和过度表达载体探索这些lncRNAs参与牙周炎的可能分子机制，为牙周炎防治提供依据。

本研究分五部分。第一部分检测不同来源的牙龈组织中长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）的表达差异性。健康人、慢性牙周炎和侵袭性牙周炎经基础治疗后的牙龈组织间存在明显lncRNAs表达差异性，侵袭性牙周炎牙龈组织中与toll样受体相关（toll-like receptor，TLR）的lnc-TLR4水平与正常牙龈组织和慢性牙周炎牙龈组织相比较有明显差异，而在慢性牙周炎牙龈组织中lnc-TLR4虽然高于正常牙龈组织，但是倍数未超过2。第二部分检测不同细胞培养体系对TLRs信号通路的影响。研究结果发现：高糖明显诱导人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，hGFs）TLR2的表达，升高核因子-κB p65核活性、肿瘤坏死因子和白细胞介素1β的水平，这些因子的水平升高是通过蛋白激酶C α、δ来实现的。第三部分检测高糖对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激hGFs后炎症细胞因子分泌的影响，发现高糖能明显促进炎症细胞因子的分泌，其作用可能通过调节hGFs表面TLR2和TLR4的表达来实现。该两部分实验为以后细胞培养提供依据。第四部分观察小分子RNA（microRNA，miRNA）-146a对TLRs信号通路的调节作用，发现miRNA-146a能通过阻断TLRs信号通路，负反馈调节炎症因子的分泌。第五部分检测lnc-TLR4在hGFs的表达以及与miRNA-146a和TLR4信号通路之间的关系。发现：侵袭性牙周炎来源的原代hGFs中lnc-TLR4与健康志愿者和慢性牙周炎患者hGFs相比较有差异，而慢性牙周炎患者hGFs中lnc-TLR4虽然高于健康志愿者，但是倍数未超过2。用E. coli LPS刺激健康hGFs后检测lnc-TLR4表达水平，lnc-TLR4和TLR4水平升高，而且lnc-TLR4对hGFs负调节炎症因子分泌，发现miRNA-146a和lnc-TLR4可能都通过白细胞受体相关激酶1/4调节TLRs信号通路。同时针对其它的lncRNAs进行研究，得到初步的研究结果。目前已发表SCI论文1篇，中文核心期刊论文1篇，会议投稿2篇（大会发言1篇），2篇SCI论文和1篇核心待发表。培养硕士研究生3人毕业，7人在读。