猪细小病毒核酸探针的研制及病毒基因组序列分析

本研究完成了BM-1株猪细小病毒（PPV）核酸探针的研制和序列分析，采用PK-15及仔猪肾细胞培养PPV，提取PF型DNA，用PstI/HindⅢ双酶切后克隆隆于PUC19质粒载体中。分别双酶切及单酶切该重组粒后，纯化出线性DNA片段，用地高辛DNA检测试剂盒来标记出探针1和探针2，检测后发现其最低检测出限分别为40pg和4pg。将该重组质粒作出3个亚克隆后，用自动测序仪按双脱氧链终止法测出双链的序列。用2对引物采和PCR-的方法，克隆出了从PvuII到DraI切点的VP2基因，2个亚克隆也采用相同的方法进行序列测定和分析。并为以后的基因工程疫苗研制奠定了基础。