高致瘤性HL-60细胞基因及蛋白质差异表达和miRNA靶标研究

肿瘤异质细胞群在演进中发生选择，导致克隆化和恶性度提高，是一个肿瘤基因组差异表达、蛋白质组选择翻译以及基因调控过程。HL-60在裸鼠体内外多次异种移植传代后，成瘤率从第一代30%提高到第四代100%，在各传代HL-60细胞系之间，能否寻找提高成瘤率的表达谱差异mRNA和差异蛋白点以及是否受miRNA调节？本课题以裸鼠高致瘤HL-60模型为研究对象，通过全基因组表达谱芯片检测、聚类分析，RNAi技术和临床功能验证，研究对比成瘤率依次提高各代高致瘤HL-60基因表达变化规律；应用差异凝胶电泳（DIGE）技术、MALDI-TOF-TOF和Western-blot验证，鉴定提高成瘤率的差异蛋白质，临床验证mRNA上调或下调以及差异蛋白质的变化；应用miRNA芯片和生物信息学，筛选致瘤性相关的miRNA,验证miRNA功能和靶标，在基因及蛋白质组和miRNA调节水平探索致瘤性提高的分子机制。

通过差异蛋白质组学（DIGE)和质谱技术，在肿瘤性逐渐提高的 HL-60、HL-60-G1、HL-60-G2、HL-60-G3、HL-60-G4细胞系中发现差异蛋白TCP1和HnRNPH1表达逐渐提高，本课题针对差异蛋白质功能进行研究。本项目按照任务书的要求进行，从差异蛋白质组学、质谱鉴定、体外细胞功能验证、临床标本再验证到耐药性研究等一系列工作，都取得比较好的实验结果，并新增加差异蛋白质肿瘤耐药性研究，主要研究成果包括四个部分：差异蛋白质组学研究和差异蛋白TCP1功能研究、靶向调控TCP1的miRNA筛选及验证、差异蛋白TCP1耐药性研究、差异蛋白TCP1和hnRNPH1在其他肿瘤细胞株中的表达及其临床验证。通过蛋白质组学研究获得几个差异蛋白质，重点针对TCP1（CCTα）及HnRNPH1进行功能验证，敲减TCP1基因可抑制HL-60细胞的增殖、克隆形成和细胞侵袭能力，促进细胞凋亡，使细胞周期阻滞于G1和G2/M期，microRNA（has-miR-340-5p）靶向调控TCP1，沉默TCP1可以提高HL-60/ADR对阿霉素的敏感性，正常人与缓解病人中TCP1的表达显著低于发病初治与复发组的病人，TCP1在正常细胞中的表达量显著低于肿瘤细胞系，恶性程度较高的表达量高于恶性程度低的细胞系。研究成果的线条清晰、研究内容深入、涉及内容广泛，图表和成果丰富，已将全部实验结果串联在一起，投稿发表一篇高分值SCI文章，培养4名硕士研究生，受此项目资助发表SCI和国际刊物2篇论文。发现两种差异蛋白质在肿瘤致瘤、转移和耐药性等方面有比较明确的作用，为治疗肿瘤侵袭转移和耐药性提供很好的治疗靶点。