脂肪乳逆转布比卡因心脏毒性的作用机制研究

Bupvacaine(Bup),Long-lasting local anesthetics,can cause severe cardiac toxicity after accidental IV administration,which is largely resistant to standard cardiopulmonary resuscitation.Though lipid emultion (LE) as effective rescue therapy for the cardiovascular collapse triggered by Bup,the positive mechanism is still unclear.The preliminary experiment we did showed that LE can ameliorate the inhibition caused by Bup.Combined with literature,this study bases on the hypothesis that linolenic and stearic,the components of LE,can improve the contractility and condutivity by changing the concentration of Ca2+、ryanodine receptor(RyR2)、phospholamban（PLB）、L-type Ca2+ channel(DHPR)、calmoduins(CaM) and calmodulins kinase II(CaMKII).Molecular biology technique was used to verify the hypothesis mentioned above, find out the exact effect target and explain the molecular mechanism.

局部麻醉时长效局麻药布比卡因（Bupivacaine,Bup）误入血管会致严重心脏毒性，复苏相当困难。脂肪乳（Lipid emultion ,LE ）能够成功救治Bup引起的心脏毒性反应，但确切机制不清楚。我们的实验结果显示LE能明显改善由Bup所致心功能抑制现象。结合文献，我们假设LE中的亚麻酸和硬脂酸成分可能通过对心肌细胞钙离子浓度、RyR2、L型电压依赖型钙离子通道(DHPR)、肌质网Ca2+ ATPase(SERCA2)、磷酸受钠蛋白（PLB）、钙调素（CaM）及钙调素激酶II（CaMKII）的影响，进而改善心肌的收缩性及传导性，实现心脏保护作用。本研究拟采用分子生物学技术，验证以上假设，阐明LE救治Bup心脏毒性的机制，为临床治疗提供理论依据。

第一部分 评价脂肪乳在逆转布比卡因心脏毒性时的疗效.目的 观察脂肪乳（LE）以及LE联合肾上腺素（EPI）在救治布比卡因（BPV）所致家犬心脏毒性时的疗效。方法 健康成年家犬21只，分为3组，每组7只：生理盐水（Saline）组（A组），20%LE组（B组），20%LE+EPI（C组）。0.75%BPV10mg/Kg-1经股静脉匀速推注，待MAP降至基础值的50%及ECG出现宽大畸形QRS波时行CPR，同时分别给予A组生理盐水4ml/kg ，B组20% LE4ml/kg，C组20%LE4ml/kg +EPI10μg/kg。记录不同时点自主循环恢复（ROSC）的家犬数量及MAP、HR、心电图PR间期、QRS间期及QT间期的变化。结果：在救治第10min时，B组ROSC数量略多于A组和C组，但差异无统计学意义，在第15和第20min时明显多于Ａ组和C组（P<0.05）。 B组家犬在第20min时MAP及HR明显高于A组和Ｃ组（P<0.05），PR间期、QRS间期、QT间期明显短于Ａ组和C组（P<0.05）。.结论：20%LE救治能明显提高家犬BPV中毒后的生存率，且救治后的血流动力学指标明显优于20%LE+EPI 10 μg/Kg-1的效果。.第二部分 脂肪乳对布比卡因致H9C2细胞凋亡的影响.目的 观察LE对BPV诱导的H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法 分组一：对照组、不同浓度LE及BPV组培养24h后观察H9C2的存活率，得到LE诱导的心肌细胞最佳增殖浓度。分组二：对照组、1%LE组、1.54mMBPV及1%LE+1.54mM BPV在不同时点（6h、12h及24h）细胞的存活率，并通过Hoechst33258染色后观察其凋亡情况，最后用流式细胞仪检测细胞的凋亡程度。结果：BPV对大鼠H9C2心肌细胞均显示出不同程度的细胞毒性作用，作用24h后1.54mM的BPV能使大多数细胞凋亡或死亡，而LE对H9C2心肌细胞生长无抑制作用，并在浓度为1%时其生长状态略优于其他浓度组。Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察发现1%LE能明显抑制1.54mM BPV所致的心肌细胞凋亡现象，进一步经流式细胞仪检测1%LE减少由BPV所诱导的细胞凋亡（P<0.05）。结论：LE能明显减少由BPV诱导的H9C2心肌细胞凋亡，其心肌细胞保护效应越明显。